50次 弗氏檸檬酸桿菌PCR試劑盒
| 參考價 | ￥ 1490 |
| 訂貨量 | ≥1 件 |
- 公司名稱 上海信裕生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 50次
- 產(chǎn)地 上海松江區(qū)
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2020/8/21 13:24:49
- 訪問次數(shù) 2949
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| 供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 50T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | XY-1042 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁 |
| 主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。 |
弗氏檸檬酸桿菌PCR試劑盒
Citrobacter freundii PCR Kit
產(chǎn)品簡介：
熒光定量 PCR 是檢測傳染性疾病的主流技術，本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量 PCR 技術為基礎開發(fā)的專門檢測弗氏檸檬酸桿菌的試劑盒。
產(chǎn)品特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒 DNA 模板。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性高。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)弗氏檸檬酸桿菌高度保守的 VP1 區(qū)設計。
5. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
產(chǎn)品名稱 | 方法 | 規(guī)格 | 價格 |
弗氏檸檬酸桿菌LAMP試劑盒 | LAMP | 50次 | 2490元 |
弗氏檸檬酸桿菌 PCR試劑盒 | PCR | 50次 | 1490元 |
弗氏檸檬酸桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 染料法 | 50次 | 2490元 |
弗氏檸檬酸桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | 探針法 | 50次 | 2990元 |
弗氏檸檬酸桿菌PCR試劑盒包裝規(guī)格及成分：
編號 | 成分 | 規(guī)格 |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 0.5 mL（棕色） |
試劑二 | 熒光 PCR 模板稀釋液 | 1 mL（黃蓋） |
試劑三 | 弗氏檸檬酸桿菌PCR 引物混合液 | 100 μL（白蓋） |
試劑四 | 弗氏檸檬酸桿菌PCR 陽性對照 (1×10E8 拷貝/μL) | 50 μL（紅蓋） |
試劑五 | DNA 病毒裂解液試用裝 | 15 次（9 mL） |
試劑六 | 使用手冊 | 1 份 |
運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
自備試劑：DNA 模板
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使用方法：
一.稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的 DNA 段作為陽性對照。
1.標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。
3.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二.樣品 DNA 的制備
7.如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 上步制備的標準曲線樣品的第 4 號（濃度為 1×10E4 拷貝/μL，10μL 相當于 1 萬拷貝）或第 5 號（濃度為 1×10E5 拷貝/μL，10μL 相當于 10 萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為 PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要 200μL 樣品，則 PC 和 NC 的體積也必須是 200μL。
8.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。?
過程 | 溫度 | 時間 |
預變性 | 94℃ | 5 min |
PCR 反應 （35 個循環(huán)） | 94℃ | 0.5 min |
50℃ | 0.5 min（采集 SYBR 通道的 熒光信號） | |
72℃ | 0.5 min | |
后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、設置 qPCR 反應（20 μL 體系，在樣品制備室進行）
9.如果只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照，6 個用于標準曲線樣品。如果做 2-3次重復，則反應設置數(shù)量相應增加 2 或 3 倍。
10.在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加）：
成分 | 樣品管 N+2 個 | PCR 陰性 對照管 | 標準曲線 樣品管（2-7 管） |
2×qPCR MagicMix （棕色管） | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
弗氏檸檬酸桿菌PCR 引 物混合液（白蓋） | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
自備 10×ROX (見注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
待測樣品 DNA 模板 | 6 μL | 不加 | 不加 |
第 7 步所得標準曲線樣 品稀釋液（2-7 號） | 不加 | 不加 | 各 6μL（2 號樣到 2 號管，3 號樣到 3 號管…） |
11.蓋上蓋子后上機，按下面參數(shù)進行 PCR（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同 而自行優(yōu)化）。
四、熒光定量 PCR 反應參數(shù)
五、數(shù)據(jù)處理
12.以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。
六、電泳檢測
13.如果有必要電泳確認，可取 10-20 uL PCR 產(chǎn)物直接在瓊脂糖凝膠上電泳產(chǎn) 物的大小為 400 bp。
熒光定量PCR結果分析:
一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段、熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化;在平臺期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級增加，PCR終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系，無法計算起始模板拷貝數(shù)。因此只有在熒光信號指數(shù)擴增階段，PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系，故選擇在這個階段進行定量分析。為了定量方便，在實時熒光定量 PCR 技術中引入了幾個重要的概念：擴增曲線、熒光閾值、CT值。
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