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產(chǎn)品展廳

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發(fā)布詢價(jià)單

化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標(biāo)物>行業(yè)專(zhuān)用試劑>生化與分子生物學(xué)用試劑>50次 弗氏檸檬酸桿菌PCR試劑盒

50次 弗氏檸檬酸桿菌PCR試劑盒

參考價(jià) 1490
訂貨量 ≥1
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 公司名稱 上海信裕生物科技有限公司
  • 品牌 其他品牌
  • 型號(hào) 50次
  • 產(chǎn)地 上海松江區(qū)
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間 2020/8/21 13:24:49
  • 訪問(wèn)次數(shù) 2928

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上海信裕生物科技有限公司是一家生物企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷(xiāo)售。并代理銷(xiāo)售Amresco,qiagen,GenWay,Sciencell,Millipore,eBioscience,Sigma、R&D、GBD、ATCC、HYCLONE等二十多家國(guó)內(nèi)外,致力于為廣大高校、科研院所和企業(yè)單位提供的科研試劑和完善的技術(shù)服務(wù),滿足生物化學(xué)、分子生物學(xué) 、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué) ELISA試劑盒等生物科技實(shí)驗(yàn)需求。
上海信裕先后與天津中醫(yī)學(xué)院、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)、華東師范大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)、南京大學(xué),暨南大學(xué),南京工業(yè)大學(xué),曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機(jī)研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒,種屬標(biāo)本齊全,有專(zhuān)門(mén)針對(duì)人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標(biāo)本的試劑盒;另有針對(duì)各種動(dòng)物(鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚(yú))的科研試劑。
公司秉承“專(zhuān)注品質(zhì)、信守承諾、積極溝通、創(chuàng)新服務(wù)”的企業(yè)文化積極參與生物領(lǐng)域的技術(shù)創(chuàng)新和技術(shù)服務(wù),力求為我國(guó)科研事業(yè)更好的,更專(zhuān)業(yè)的服務(wù)!

 

Elisa試劑盒,試劑盒,抗體,細(xì)胞,血清,生化試劑,生物培養(yǎng)基,實(shí)驗(yàn)耗材等科研產(chǎn)品

供貨周期 一周 規(guī)格 50T
貨號(hào) XY-1042 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

弗氏檸檬酸桿菌PCR試劑盒

Citrobacter freundii PCR Kit

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

熒光定量 PCR 是檢測(cè)傳染性疾病的主流技術(shù),本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量 PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的專(zhuān)門(mén)檢測(cè)弗氏檸檬酸桿菌的試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn):

1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏性高。

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高,引物是根據(jù)弗氏檸檬酸桿菌高度保守的 VP1 區(qū)設(shè)計(jì)。

5. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。

 

產(chǎn)品名稱

方法

規(guī)格

價(jià)格

弗氏檸檬酸桿菌LAMP試劑盒

LAMP

50次

2490元

弗氏檸檬酸桿菌 PCR試劑盒

PCR

50次

1490元

弗氏檸檬酸桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒

染料法

50次

2490元

弗氏檸檬酸桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒

探針?lè)?/span>

50次

2990

弗氏檸檬酸桿菌PCR試劑盒包裝規(guī)格及成分:

編號(hào)

成分

規(guī)格

試劑一

2×PCR MagicMix

0.5 mL(棕色)

試劑二

熒光 PCR 模板稀釋液

1 mL(黃蓋)

試劑三

弗氏檸檬酸桿菌PCR 引物混合液

100 μL(白蓋)

試劑四

弗氏檸檬酸桿菌PCR 陽(yáng)性對(duì)照 

(1×10E8 拷貝/μL)

50 μL(紅蓋)

試劑五

DNA 病毒裂解液試用裝

15 次(9 mL)

試劑六

使用手冊(cè)

1 份

運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。

自備試劑:DNA 模板

?

使用方法:

一.稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供無(wú)傳染性的 DNA 段作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。

3.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供),充分震蕩1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4.換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5.換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二.樣品 DNA 的制備

7.如果有 N 個(gè)樣品,必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?10μL 上步制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的第 4 號(hào)(濃度為 1×10E4 拷貝/μL,10μL 相當(dāng)于 1 萬(wàn)拷貝)或第 5 號(hào)(濃度為 1×10E5 拷貝/μL,10μL 相當(dāng)于 10 萬(wàn)拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為 PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要 200μL 樣品,則 PC 和 NC 的體積也必須是 200μL。

8.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。?

過(guò)程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

94℃

5 min

 

PCR 反應(yīng)

(35 個(gè)循環(huán))

94℃

0.5 min

50℃

0.5 min(采集 SYBR 通道的 熒光信號(hào))

72℃

0.5 min

后延伸

72℃

10 min

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20 μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)

9.如果只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照,6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。如果做 2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加 2 或 3 倍。

10.在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后后加):

成分

樣品管 N+2 個(gè)

PCR 陰性 對(duì)照管

標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix (棕色管)

10 μL

10 μL

各 10 μL

弗氏檸檬酸桿菌PCR 引 物混合液(白蓋)

2 μL

2 μL

各 2 μL

自備 10×ROX (見(jiàn)注)

2 μL

2 μL

各 2 μL

待測(cè)樣品 DNA 模板

6 μL

不加

不加

第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣 品稀釋液(2-7 號(hào))

不加

不加

各 6μL(2 號(hào)樣到 2 號(hào)管,3 號(hào)樣到 3 號(hào)管…)

11.蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR(具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同 而自行優(yōu)化)。

四、熒光定量 PCR 反應(yīng)參數(shù)

五、數(shù)據(jù)處理
12.以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

六、電泳檢測(cè) 
13.如果有必要電泳確認(rèn),可取 10-20 uL PCR 產(chǎn)物直接在瓊脂糖凝膠上電泳產(chǎn) 物的大小為 400 bp。

熒光定量PCR結(jié)果分析:
一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段、熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化;在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)增加,PCR終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線性關(guān)系,無(wú)法計(jì)算起始模板拷貝數(shù)。因此只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段,PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,故選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了幾個(gè)重要的概念:擴(kuò)增曲線、熒光閾值、CT值。



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