一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備?

1. ?設(shè)備與試劑?

• ?關(guān)鍵設(shè)備?：冷凍切片機(jī)（箱體溫度-20℃至-22℃）、OCT包埋劑、蔗糖梯度溶液（10%/15%/20%）、4%多聚甲醛灌注液
  。

• ?輔助工具?：解剖器械、鋁箔模具、防卷板、細(xì)毛筆、載玻片
  。

2. ?動(dòng)物處理?

• 麻醉大鼠后，經(jīng)左心室灌注生理鹽水（約50ml）至流出液澄清，再灌注4%多聚甲醛（約100ml）至組織硬化
  。

?二、腦組織處理步驟?

1. ?取材與固定?

• 剝離腦組織，置于4%多聚甲醛中4℃后固定12-24小時(shí)
  。

• ?脫水?：依次轉(zhuǎn)入10%、15%、20%蔗糖溶液（4℃），每級(jí)至組織沉底（通常需4小時(shí)至過夜）
  。

2. ?包埋與速凍?

• 吸干組織表面液體，腹側(cè)向下放置于鋁箔模具中，用OCT包埋劑覆蓋，避免氣泡
  。

• 液氮速凍或-80℃保存?zhèn)溆?span disable-audio="true" disable-copy="true" style="margin: 0px; padding: 0px; -webkit-font-smoothing: antialiased; scrollbar-color: rgba(184, 186, 193, 0.6) transparent; scrollbar-width: thin;">
  。

?三、冷凍切片操作?

1. ?切片機(jī)設(shè)置?

• 箱體溫度-20℃，樣品頭溫度-22℃（可根據(jù)實(shí)際調(diào)整）
  。

2. ?修塊與切片?

• 免疫組化：20-30μm（貼片）或30-50μm（漂片）

• RNA原位雜交：12-20μm
  。

• 修塊厚度50-100μm，接近組織后調(diào)整切片厚度：

• 使用防卷板防止切片卷曲，毛筆輔助轉(zhuǎn)移切片至培養(yǎng)皿
  。

?四、注意事項(xiàng)?

• ?樣本干燥?：包埋前需吸干蔗糖溶液，否則易導(dǎo)致OCT與組織分離
  。

• ?溫度控制?：切片過程中保持低溫穩(wěn)定性，避免組織軟化
  。

• ?抗原保護(hù)?：冰凍切片優(yōu)于石蠟切片，能更好保存抗原活性。

?五、應(yīng)用場(chǎng)景?

• ?神經(jīng)環(huán)路研究?：如病毒示蹤或探針定位驗(yàn)證。

• ?病理分析?：腦損傷模型的組織學(xué)評(píng)估

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