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原代滑膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
- 公司名稱 伊萊博生物科技（上海）有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時(shí)間 2025/5/15 17:31:31
- 訪問次數(shù) 1132
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一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備?
?樣本來源?
?人類樣本?：關(guān)節(jié)置換術(shù)獲取的滑膜組織（RA、骨關(guān)節(jié)炎或創(chuàng)傷患者）
?小鼠樣本?：C57BL/6小鼠髖關(guān)節(jié)周圍滑膜組織
?試劑與耗材?
消化酶：0.5% IV型膠原酶（人類）或Pancreatin?（小鼠）
培養(yǎng)基：DMEM/F12 + 10% FBS + 1%雙抗
器械：眼科剪、鑷子、200目細(xì)胞篩、15ml離心管
?二、組織處理與消化?
?組織清洗?
人類樣本：PBS沖洗去除血液，剔除脂肪及壞死組織
小鼠樣本：75%乙醇浸泡5分鐘后剝離滑膜
?消化方法?
剪碎組織后加入0.5% IV型膠原酶，37℃振蕩消化60分鐘（人類）
小鼠滑膜需額外渦輪振蕩1.5分鐘以提高細(xì)胞釋放率
?酶消化法?：
?組織塊法?：將1mm3組織塊直接貼壁培養(yǎng)，48小時(shí)后補(bǔ)充培養(yǎng)基
?三、細(xì)胞培養(yǎng)與純化?
?初次培養(yǎng)?
消化產(chǎn)物經(jīng)100μm濾網(wǎng)過濾，離心（1000rpm, 5分鐘）后重懸接種
培養(yǎng)條件：37℃、5% CO?，換液時(shí)間為接種后3小時(shí)（去除未貼壁細(xì)胞）
?差速貼壁純化?
傳代時(shí)采用Pancreatin?短時(shí)消化（30秒-1分鐘），優(yōu)先收集成纖維細(xì)胞（巨噬細(xì)胞殘留較少）
通過3次傳代（15-20天）可去除99%的滑膜巨噬細(xì)胞
?四、鑒定與質(zhì)量控制?
?形態(tài)學(xué)鑒定?
原代SFs呈梭形，核橢圓形，貼壁生長(zhǎng)
混雜的圓形巨噬細(xì)胞隨傳代逐漸消失
?免疫標(biāo)記?
Vimentin陽性（＞98%）、CD68陰性（流式或免疫熒光）
?五、注意事項(xiàng)?
?污染控制?：滑膜組織含血管豐富，需加強(qiáng)雙抗處理
?消化優(yōu)化?：膠原酶濃度過高（＞1%）可能導(dǎo)致細(xì)胞活性下降
?培養(yǎng)基選擇?：含20% FBS可促進(jìn)初期貼壁，但需逐步降至10%以避免過度增殖
?六、應(yīng)用方向?
?RA研究?：通過SFs侵襲實(shí)驗(yàn)?zāi)M滑膜炎病理過程
?藥物篩選?：測(cè)試抗纖維化或抗炎藥物對(duì)SFs活性的影響
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