微絲染色液(R250 法)
 

　　產(chǎn)品貨號：R21851
 

　　產(chǎn)品規(guī)格：5×50ml
 

　　產(chǎn)品簡介： 細胞骨架一般是指真核細胞胞質(zhì)中縱橫交錯的纖維網(wǎng)，觀察細胞骨架的方法有電鏡、組織化學(xué)、酶標(biāo)記、免 疫熒光等。微絲(microfilament)是由肌動蛋白構(gòu)成的纖維，微絲在不同種類的細胞中與某些結(jié)合蛋白一起形成不 同的亞細胞結(jié)構(gòu)(如肌肉細絲、腸上皮微絨毛軸心、應(yīng)力纖維等)。 尚寶生物微絲染色液(R250 法)主要顯示由微絲構(gòu)成的應(yīng)力纖維，由于細胞對細胞基質(zhì)的附著和維持扁平鋪展 的形狀，該纖維在體外培養(yǎng)的貼壁細胞中尤其發(fā)達?？捡R斯亮藍 R250 染色微絲并非特異性的，因為 R250 可以 對多種蛋白質(zhì)染色。尚寶生物生產(chǎn)的微絲染色液在染色過程中由于微觀結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，有些纖維在光學(xué)顯微鏡下無 法辨認，因此能夠看到的纖維主要是由微絲組成的應(yīng)力纖維。本試劑僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他 用途。 產(chǎn)品組成： 產(chǎn)品名稱 5×50ml 儲存條件 試劑(A): PBS buffer(10×) 50ml 室溫 試劑(B): TM buffer 50ml 室溫 試劑(C): M buffer(3×) 50ml 室溫 試劑(D): Microfilament fluid 50ml 4℃，避光 試劑(E): R250staining solution 50ml 室溫
 

　　操作步驟： (一)、動物細胞微絲 1. 取材：在蓋玻片上細胞培養(yǎng)，生長密度達 60～70%時細胞面朝上置于稱量瓶中。用去離子水稀釋 PBS buffer(10 ×)至 1×，用 1×PBS buffer 清洗 1min，重復(fù) 1 次。 2. 抽提：棄 PBS buffer，加入 2ml TM buffer，蓋上稱量瓶蓋子，37℃處理 25～30min。 3. 漂洗：棄 TM buffer，用去離子水稀釋 M buffer(3×)至 1×，用 1×M buffer 清洗 2min，重復(fù) 2 次。 4. 固定：稍微晾干，加入 2ml Microfilament fluid，固定細胞 15～20min。 5. 沖洗：棄 Microfilament fluid，用 1×PBS buffer 輕輕清洗 2min，重復(fù) 1 次。 6. 染色：棄 PBS buffer，把蓋玻片立于吸水濾紙上吸去邊緣水分，加入 2ml R250 staining solution，染色 20～ 25min。 7. 去離子水沖洗染液，濾紙吸干水分，晾干，鏡檢或樹脂封片。 (二)、植物細胞微絲 1. 取材：用去離子水稀釋 PBS buffer(10×)至 1×。輕輕撕取約 1cm 洋蔥鱗莖內(nèi)皮，置于預(yù)先加入 1×PBS buffer 的稱量瓶中，孵育 5～10min，使其下沉。 2. 抽提：棄 PBS buffer，加入 2ml TM buffer，蓋上稱量瓶蓋子，37℃處理 30min。 3. 漂洗：棄 TM buffer，用去離子水稀釋 M buffer(3×)至 1×，用 1×M buffer 清洗 3～5min，重復(fù) 2 次。 4. 固定：稍微晾干，加入 2ml Microfilament fluid，固定細胞 20～25min。 5. 沖洗：棄 Microfilament fluid，用 1×M buffer 清洗 3～5min，重復(fù) 2 次。