l 細胞鑒定

種屬鑒定已通過

l 細胞來源

國家資源庫

l 細胞背景

這株細胞來源于轉基因小鼠中生長的一個胰腺腫瘤(胰島素瘤)。 這種小鼠攜帶了大鼠胰島素II基因啟動子調控的SV40早期基因的假基因結構。 細胞包含豐富的胰島素和小量的胰高血糖素及生長抑素。響應葡萄糖而分泌胰島素[PubMed:7533732]。

l 細胞特性

1） 來源：胰島素瘤

2） 形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長，少量懸浮。

3） 含量：>1x106  細胞數

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用。

l 培養(yǎng)條件：

1） 準備DMEM(含1.5g/L NaHCO3，推薦：awcell-128-0001或者(GIBCO,貨號12800017，添加NaHCO3 1.5g/L)  ）培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，15%；雙抗1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項：

注意事項：

1. Beta-TC-6細胞生長緩慢，這些細胞從冷凍保存中恢復需要幾天的時間。開始時通常具有少量可存活的漂浮細胞，其最終會形成簇并粘附在培養(yǎng)瓶底部，它們成簇地連接并形成堆積細胞的島嶼。細胞不會*融合，培養(yǎng)物上會粘附可存活的漂浮細胞，可通過溫和離心保留。在添加細胞前，培養(yǎng)基至少要提前15-30分鐘平衡溫度和PH。

2. 該細胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培養(yǎng)基中生長良好，大部分品牌的DMEM含有較高濃度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/L NaHCO3）培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞時需要提高CO2濃度（7%-10%）。

該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞，傳代可以參考以下方法：

1. 收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3. 將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

l 運輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全:

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。