l 細(xì)胞鑒定

STR鑒定已通過

l 細(xì)胞來源

國家資源庫

l 細(xì)胞背景

該細(xì)胞是1970從一名69歲的白人女性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的胸腔積液中分離建立的。該細(xì)胞保留了多個(gè)分化乳腺上皮的特性，包括：能通過胞質(zhì)雌激素受體加工雌二醇并能形成隆突結(jié)構(gòu)（domes）；該細(xì)胞表達(dá)WNT7B癌基因；TNF-α可以抑制MCF-7細(xì)胞的生長；抗雌激素處理能調(diào)節(jié)細(xì)胞胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白（IGFBP）的分泌。

l 培養(yǎng)條件：

1） 準(zhǔn)備MEM（推薦awcell-0012）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；添加0.01mg/ml 胰島素；雙抗1%。2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項(xiàng)：

注意事項(xiàng)：

a. mcf-7 細(xì)胞一般情況下是生長緩慢的細(xì)胞系，前期呈島狀生長，隨著細(xì)胞生長，細(xì)胞會(huì)逐步變成扁平單層細(xì)胞。通常需要6-12天才能達(dá)到80%生長密度，如果生長速度比正常情況還要緩慢，可能需要換另外批次的血清，把血清濃度提高到20%也有助于改善細(xì)胞生長情況。

b. mcf-7細(xì)胞在復(fù)蘇和傳代后，會(huì)在培養(yǎng)基中觀察到成團(tuán)的細(xì)胞漂浮物，對(duì)于這個(gè)細(xì)胞來說這是正常的情況，在復(fù)蘇和傳代后前三天可以靜置細(xì)胞不做處理，三天后貼壁情況會(huì)有所改善，但懸浮的細(xì)胞團(tuán)仍會(huì)出現(xiàn)，這些懸浮的細(xì)胞是活細(xì)胞在換液和傳代時(shí)需要離心回收，這些懸浮細(xì)胞團(tuán)可以通過使用移液器（5mL或者更?。﹣泶瞪?，重新打入到貼壁細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。丟棄這些懸浮細(xì)胞會(huì)使細(xì)胞密度變低，細(xì)胞生長緩慢。

c. 使用0.25% (w/v) Trypsin - 0.53 mM EDTA 消化細(xì)胞。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

4）運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

l 運(yùn)輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。