非標定量（Label-free）實驗

非標定量(Label-free)

非標定量(Label-fiee) :是一種非標記的差異蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),不需要使用同位素標記物標記肽段，直接根據(jù)質(zhì)譜峰的信號強度來對肽段或蛋白進行相對定量。Label-free通過HPLC分級液質(zhì)聯(lián)用對酶解肽段進行分析. 現(xiàn)在基于質(zhì)譜的非標定量技術(shù)主要有兩種: 一是根據(jù)一級質(zhì)譜相關(guān)的肽段峰強度以及峰面積等信息進行蛋白定量，二是根據(jù)蛋白對應(yīng)肽段的二級質(zhì)譜總數(shù)(spectral counts)進行定量。

實驗步驟

1.蛋白前期處理，包括去除核酸，蛋白純化定量，SDS聚丙烯酰氨凝膠電泳;

2.蛋白質(zhì)膠內(nèi)酶切;

3.多肽純化; .

4.多肽混合物的質(zhì)譜分析，包括質(zhì)譜鑒定和定量信息比較;

5.生信分析

結(jié)果展示

實驗周期及交付標準

1.實驗周期: 4-6周

2.交付標準:蛋白定量結(jié)果、鑒定結(jié)果、質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)、生信分析結(jié)果(G0分析. KEGG分析等等)

需確認的信息

1.樣本的種屬

2.樣本的類型(組織or細胞or血液)

3.樣本的數(shù)量及分組

4.分析要求

參考文獻

[1]HuS, Qiu N, Liu Y , et al. Identification and comparative proteomic study of quail and duck egg white protein using 2-dimensional gel electrophoresis and matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight tandem mass spectrometryanalysis[J]. Poultry Science, 2016:pew033.

[2] Bouvet M , Turkieh A，Acosta-Martin A E , et al. Proteomic Profiling of Macrophages by 2D Electrophoresis[J]. Journal

of Visualized Experiments, 2014(93).