HEK-293T人胚腎細胞介紹：

種屬：人；懸浮生長；生長周期：3~4天

HEK-293T細胞是293T（293tsA1609neo）細胞系（ATCC CRL-11268）的衍生物。細胞持續(xù)表達SV40抗原，該細胞常用于轉(zhuǎn)染實驗，轉(zhuǎn)染效率較高。（轉(zhuǎn)染一般以50%密度鋪板，待細胞剛剛貼到皿壁上后（一般8-10小時），即可進行轉(zhuǎn)染操作）。

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

生長特性：貼壁生長

培 養(yǎng) 基：MEM培養(yǎng)基，90%；FBS，10%

生長條件：氣相：空氣,95%；二氧化碳，5%；溫度：37 ℃

傳代方法：1：2至1：6，每周2次

凍存條件：90%培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲存

支原體檢測： 陰性

HEK-293T人胚腎細胞步驟：

1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm 皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2)細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為類：

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml YM，細胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4min 1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。