原位雜交實驗步驟:前期胚胎的制備。

原位雜交**天進行重新水化和固定、預雜交、雜交。

原位雜交第二天進行1將探針回收，放于-20C保存(通常探針可重復使用十次左右)2加入50%甲酰按/2XSSCT溶液1量升，60℃，放置30分鐘，重復一次。3署換2XSSCT1ml，60°℃，放置15分鐘。4詈換0.2XsSCT1ml，60℃，放置30分鐘，重復一次。5用MABT洗兩次，每次五分鐘，放在搖床輕輕搖動。6室溫下加1ml 1:2:7溶液，時間為一小時。7 按1:3000的比例在1∶2:7溶液中加入酶連**抗體，40冰箱過夜。

原位雜交第三天進行1)用1ml含10%熱滅**清的MABT溶液置換抗體溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mIMABT置換，25分鐘，再用1mIMABT溶液詈換，一小時以上，后用1mIMABT溶液置換，25分鐘。2用1ml 1mM米勝的Staining buffer洗一次，每次放置五分鐘。3)將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中，吸去stainingbuffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM米唑)，十六孔板外面包,上錫箔紙以避光，避免搖動，室溫下顯色。4)每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色5)將顯色的胚胎中的底物吸出，用

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