人胰腺癌類器官培養(yǎng)試劑盒

Pancreatic Cancer Organoid Culture Kit

人胰腺癌類器官培養(yǎng)試劑盒使用說明

請在無菌環(huán)境下配制類器官完培：

1.將類器官培養(yǎng)添加物置于冰上或4℃冰箱中解凍，解凍后需充分混勻。

注：解凍后的添加物需立即使用或分裝，-20℃保存最長6個月。再次解凍后需立即使用，避免反復凍融。

2.將全部補充劑加入同一試劑盒中的基礎培養(yǎng)基中，充分混勻。

注：本產(chǎn)品中已含有抗生素。完培在4℃最長保存2周，建議分裝后凍存于-20℃保存。

腫瘤類器官的構建方法

（一）手術/穿刺樣本

1.將樣本從Primary Tissue Storage Solution（R25831）中取出，置于5mL含有1%雙抗的DPBS中清洗，重復清洗3次以上。

2.棄去含有1%雙抗的DPBS后，將樣本用surgical剪刀剪碎至肉糜狀，大小約0.5mm3，用5mL Tumor Tissue Digestion Kit（R25829）將肉糜狀的樣本組織轉移至15mL離心管中。

3.將該離心管置于搖床37℃溫和搖晃消化60min，使管中懸濁液可接觸到管蓋及管底，但不要過于劇烈，在搖晃過程中，約每30min取200μL懸濁液于顯微鏡下觀察是否有細胞，若觀察到大量的單細胞，應提前終止消化。

4.消化結束后，于該離心管中加入500μL血清終止消化，于1,200rpm/min離心5min。

5.棄去上清，用2mL含有1%雙抗的DPBS對細胞沉淀進行重懸。

6.在50mL離心管上架一個100μm的細胞濾網(wǎng)，用槍頭潤洗液（R25832）對細胞濾網(wǎng)和后續(xù)使用的槍頭進行潤洗，將第5步中的細胞重懸液加入細胞濾網(wǎng)中，過濾后的細胞懸液于1,200rpm/min離心5min。

7.棄去上清，若細胞沉淀顏色呈紅色，加入2mL紅細胞裂解液吹打后冰上裂紅10min；若細胞沉淀顏色呈黃白色，直接進行下一步。

8.細胞計數(shù)，按照1,000個細胞/μL LYJUNE®Matrix低因子無酚紅基質膠（M10270）的比例重懸細胞，注意不要產(chǎn)生氣泡，于冰上操作。

9.含有細胞的基質膠點入細胞培養(yǎng)板中形成膠滴，于37℃培養(yǎng)箱中正置5min，倒置15min，使膠滴凝固卻避免細胞貼壁。

10.膠滴凝固后，貼著細胞培養(yǎng)孔壁緩緩加入本產(chǎn)品——類器官完培，以淹沒整個膠滴。將DPBS圍繞加入已接種類器官的孔中，以維持細胞培養(yǎng)板的濕度。置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

（二）惡性積液樣本

1.將惡性積液樣本轉移至離心管中，于1,200rpm/min離心5min。

2.棄去上清，用20mL含有1%雙抗的DPBS對細胞沉淀進行重懸，于1,200rpm/min離心5min。

3.棄去上清，用5mL含有1%雙抗的DPBS對細胞沉淀進行重懸。

4.在50mL離心管上架一個100μm的細胞濾網(wǎng)，用槍頭潤洗液（R25832）對細胞濾網(wǎng)和后續(xù)使用的槍頭進行潤洗，將第3步中的細胞重懸液加入細胞濾網(wǎng)中，過濾后的細胞懸液于1,200rpm/min離心5min。

5.棄去上清，若細胞沉淀顏色呈紅色，加入2mL紅細胞裂解液吹打后冰上裂紅10min；若細胞沉淀顏色呈黃白色，直接進行下一步。

6.細胞計數(shù)，按照1,000個細胞/μL LYJUNE®Matrix低因子無酚紅基質膠（M10270）的比例重懸細胞，注意不要產(chǎn)生氣泡，于冰上操作。

7.含有細胞的基質膠點入細胞培養(yǎng)板中形成膠滴，于37℃培養(yǎng)箱中正置5min，倒置15min，使膠滴凝固卻避免細胞貼壁。

8.膠滴凝固后，貼著細胞培養(yǎng)孔壁緩緩加入本產(chǎn)品——人胰腺癌類器官培養(yǎng)試劑盒，以淹沒整個膠滴。將DPBS圍繞加入已接種類器官的孔中，以維持細胞培養(yǎng)板的濕度。置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。