人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒是為在體外培養(yǎng)和擴(kuò)增人CD34+造血干/前體細(xì)胞而專門設(shè)計(jì)的一款含血清培養(yǎng)基套裝。該試劑盒可在7天內(nèi)誘導(dǎo)人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴(kuò)增達(dá)~10倍，是研究人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴(kuò)增和功能、以及產(chǎn)生人CD34+造血干/前體細(xì)胞的重要培養(yǎng)系統(tǒng)。

產(chǎn)品特點(diǎn)

針對人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴(kuò)增設(shè)計(jì)而成

產(chǎn)品成分

其他本試劑盒未提供但需用的重要試劑和組分

人CD34+細(xì)胞磁珠分選試劑

MS5基質(zhì)細(xì)胞

*培養(yǎng)基配制

(在無菌生物安全柜中，開展以下操作)

1.在4℃冰箱解凍補(bǔ)充因子和胎牛血清，混勻后使用。

2.擴(kuò)增培養(yǎng)基配制：將1體積的擴(kuò)增補(bǔ)充因子和10體積的血清加入到89體積的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，充分混勻，得到人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基。如取100ul補(bǔ)充因子和1ml血清加入至8.9ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基，以此類推。

使用說明

(請?jiān)敿?xì)閱讀使用說明后再開始相關(guān)實(shí)驗(yàn))

1.D0：收集培養(yǎng)的MS5細(xì)胞，使用含10ng/ml的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度至＜1*10^7/ml，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中，37℃，5% CO₂，孵育3小時(shí)。

2.使用20ml含有2.5%血清的PBS緩沖液*清洗MS5細(xì)胞

3.重復(fù)步驟2.

4.使用MS5培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為2.5*10^5/ml，按照如下表格鋪于培養(yǎng)板，過夜培養(yǎng)使細(xì)胞貼壁：

5.D1：使用磁珠分選人CD34+造血干/前體細(xì)胞（參考所使用試劑盒的說明書)，計(jì)數(shù)。
注：G-CSF富集的健康供體每100ml外周血中約含有5*10^5CD34+造血干/前體細(xì)胞。

6.使用擴(kuò)增培養(yǎng)基重懸CD34+造血干/前體細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度至5*10^4/ml，按照如下表格所示將細(xì)胞鋪于培養(yǎng)板（鋪板之前去除MS5培養(yǎng)基）：

7.將培養(yǎng)板置于細(xì)胞培養(yǎng)箱，37℃，5%CO2，靜置培養(yǎng)。

8.D3：半量換液。小心貼培養(yǎng)板側(cè)壁用槍尖吸走1/2體積舊培養(yǎng)基，補(bǔ)充加入新鮮擴(kuò)增培養(yǎng)基至初始培養(yǎng)體積（步驟6表格）。

9.D6：半量換液，同步驟8.

10.D7：輕輕吹打細(xì)胞，收集懸浮細(xì)胞，即為擴(kuò)增的人CD34+造血干/前體細(xì)胞，可進(jìn)行后續(xù)操作和分析。

數(shù)據(jù)展示

圖：人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴(kuò)增鑒定。磁珠分選的人CD34+造血干/前體細(xì)胞按照上述說明培養(yǎng)7天后，進(jìn)行表型鑒定及擴(kuò)增倍數(shù)鑒定。