人CD34+造血干/前體細胞擴增試劑盒是為在體外培養(yǎng)和擴增人CD34+造血干/前體細胞而專門設計的一款含血清培養(yǎng)基套裝。該試劑盒可在7天內(nèi)誘導人CD34+造血干/前體細胞擴增達~10倍，是研究人CD34+造血干/前體細胞擴增和功能、以及產(chǎn)生人CD34+造血干/前體細胞的重要培養(yǎng)系統(tǒng)。

產(chǎn)品特點

針對人CD34+造血干/前體細胞擴增設計而成

產(chǎn)品成分

其他本試劑盒未提供但需用的重要試劑和組分

人CD34+細胞磁珠分選試劑

MS5基質(zhì)細胞

*培養(yǎng)基配制

(在無菌生物安全柜中，開展以下操作)

1.在4℃冰箱解凍補充因子和胎牛血清，混勻后使用。

2.擴增培養(yǎng)基配制：將1體積的擴增補充因子和10體積的血清加入到89體積的基礎培養(yǎng)基中，充分混勻，得到人CD34+造血干/前體細胞擴增培養(yǎng)基。如取100ul補充因子和1ml血清加入至8.9ml基礎培養(yǎng)基，以此類推。

使用說明

(請詳細閱讀使用說明后再開始相關實驗)

1.D0：收集培養(yǎng)的MS5細胞，使用含10ng/ml的培養(yǎng)基重懸細胞，調(diào)整細胞密度至＜1*10^7/ml，置于細胞培養(yǎng)箱中，37℃，5% CO₂，孵育3小時。

2.使用20ml含有2.5%血清的PBS緩沖液*清洗MS5細胞

3.重復步驟2.

4.使用MS5培養(yǎng)基重懸細胞，調(diào)整細胞密度為2.5*10^5/ml，按照如下表格鋪于培養(yǎng)板，過夜培養(yǎng)使細胞貼壁：

5.D1：使用磁珠分選人CD34+造血干/前體細胞（參考所使用試劑盒的說明書)，計數(shù)。
注：G-CSF富集的健康供體每100ml外周血中約含有5*10^5CD34+造血干/前體細胞。

6.使用擴增培養(yǎng)基重懸CD34+造血干/前體細胞，調(diào)整細胞密度至5*10^4/ml，按照如下表格所示將細胞鋪于培養(yǎng)板（鋪板之前去除MS5培養(yǎng)基）：

7.將培養(yǎng)板置于細胞培養(yǎng)箱，37℃，5%CO2，靜置培養(yǎng)。

8.D3：半量換液。小心貼培養(yǎng)板側(cè)壁用槍尖吸走1/2體積舊培養(yǎng)基，補充加入新鮮擴增培養(yǎng)基至初始培養(yǎng)體積（步驟6表格）。

9.D6：半量換液，同步驟8.

10.D7：輕輕吹打細胞，收集懸浮細胞，即為擴增的人CD34+造血干/前體細胞，可進行后續(xù)操作和分析。

數(shù)據(jù)展示

圖：人CD34+造血干/前體細胞擴增鑒定。磁珠分選的人CD34+造血干/前體細胞按照上述說明培養(yǎng)7天后，進行表型鑒定及擴增倍數(shù)鑒定。