支原體檢測試劑盒
| 參考價 | ￥2970.00 |
- 公司名稱 上海聯(lián)贏生物科技有限公司
- 品牌
- 型號
- 所在地上海市
- 廠商性質(zhì)代理商
- 更新時間2023/7/28 11:39:26
- 訪問次數(shù) 729
| 100 test | 2970.00元 | 100 個 可售 |
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥,綜合 |
|---|
在細胞培養(yǎng)中，良好的實驗規(guī)范和定期檢測支原體污染也十分必要。支原體檢測試劑盒支原體檢測的方法有很多種，如直接培養(yǎng)、DNA 熒光染色、ELISA和PCR法等。支原體檢測試劑盒主要采用PCR方法對各種生物材料（如細胞培養(yǎng)物、實驗動物分泌物、動物血清等）支原體感染的檢測。通過PCR方法檢測培養(yǎng)細胞等生物材料中的支原體，所用引物為根據(jù)支原體16S-23S rRNA序列保守區(qū)域設(shè)計，只特異性擴增支原體 DNA，檢出靈敏度與特異性均較高。PCR擴增及電泳分析只需數(shù)個小時，操作方便簡單。
二、產(chǎn)品特點
方法學(xué)：PCR法
特點：靈敏、特異、快速，操作簡便
三、產(chǎn)品成分
組分編號 | 組分名稱 | 規(guī)格 | 儲存條件 |
-A | Green Taq Mix | 250μl | -20℃ |
-B | ddH2O | 250μl | |
-C | Positive Control Template | 50μl | |
-D | Primers | 50μl |
四、使用說明
(請詳細閱讀使用說明后再開始相關(guān)實驗)
1.待測細胞連續(xù)傳代3次或培養(yǎng)至兩周；
2.細胞達到80% confluency或以上的時候，取1ml上清，進行低速離心（300g，5min，4℃）；
3.離心結(jié)束后取950μl上清液，轉(zhuǎn)移至新的無菌EP管中，以去除培養(yǎng)基中的細胞；
4.將上清液高速離心（12000g，10min，4℃），離心結(jié)束后，去除900μl上清，剩余50ul用以重懸沉淀（可能肉眼不可見）；
5.將重懸好的沉淀放置4度冰箱，作為PCR的模板備用；
根據(jù)下表，配制PCR反應(yīng)液：
試劑 | 實驗組 | 陽性對照 | 陰性對照 |
A | 12.5μl | 12.5μl | 12.5μl |
待測樣品 | 5μl | / | / |
C | / | 5μl | / |
B | 5.5μl | 5.5μl | 10.5μl |
D | 2μl | 2μl | 2μl |
★注：為防止Positive Control Template 污染，請將實驗組和陰性對照組加完以后，最后再將C液加入陽性對照組
6.PCR程序
步驟 | 溫度 | 反應(yīng)時間 | 循環(huán)數(shù) |
Step 1 | 95℃ | 5min | 1 |
Step 2 | 94℃ | 30s | 5 |
50℃ | 30s | ||
72℃ | 35s | ||
Step 3 | 94℃ | 15s | 23 |
56℃ | 15s | ||
72℃ | 30s | ||
Hold | 12℃ | ∞ | / |
7.制備DNA gel：稱取一定量Argrose粉末，用1X TAE buffer配制成1.5%的DNA GEL；
8.待PCR反應(yīng)結(jié)束后，取8-10μl的PCR 反應(yīng)液（無需要加 loading buffer）直接進行1.5%瓊脂糖凝膠電泳，確認PCR擴增產(chǎn)物；
9.目的條帶為518bp。示例如下：
五、推薦使用頻率
新細胞進入實驗室 | 必檢 |
液氮保存前 | 必檢 |
定期常規(guī) | 每月一次 |
發(fā)現(xiàn)污染后 | 每周一次 |
發(fā)現(xiàn)細胞異常 | 隨時檢測 |
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