產(chǎn)品介紹：
YobibioTrans R-100 RNA Transfection Reagent是一種特別的RNAi特異性陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，本品推薦用于將siRNA、microRNA(miRNA)、mimic、inhibitor 等小片斷RNA 轉(zhuǎn)染入動(dòng)物細(xì)胞（包括各種細(xì)胞系、原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞等）。本品可以常溫運(yùn)輸，本品在多種細(xì)胞系的驗(yàn)證中均表現(xiàn)了很好的RNA 轉(zhuǎn)染效率，并有很低的細(xì)胞毒性。
特點(diǎn)：

1，超高的轉(zhuǎn)染效率，且所需 RNAi 濃度低，基因抑制效果更好，非特異性效應(yīng)極少
2，針對(duì) miRNA 拮抗劑和模擬物具有出色的轉(zhuǎn)染效率 ·細(xì)胞毒性低、易于優(yōu)化
3，可用于多種細(xì)胞類型
4，簡(jiǎn)單、高通量的即用型轉(zhuǎn)染

規(guī)格包裝: （備注：以下為常用規(guī)格，更多規(guī)格可根據(jù)客戶需求定制）
    
儲(chǔ)存事項(xiàng)：冰袋或者濕冰運(yùn)輸，短時(shí)間內(nèi)可室溫運(yùn)輸，但需避免光源熱源，長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存于 4℃，切勿凍存，有效期 24 個(gè)月。
重要提示：
產(chǎn)品用于：僅供研究使用，不適用于人或動(dòng)物的體外診斷與治療。
由于實(shí)驗(yàn)受多種因素影響具有不確定性，本說(shuō)明書操作說(shuō)明僅供參考，最終解釋權(quán)歸本公司所有。
警告！產(chǎn)品對(duì)人體危害性未知，請(qǐng)遵循操作說(shuō)明。穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)眼鏡、衣服和手套！如果不小心接觸，應(yīng)立即用大量的水沖洗，如引起身體不適應(yīng)前往醫(yī)院治療。
注意事項(xiàng)
•整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程避免細(xì)胞污染由于不同細(xì)胞耐受性不同，由于不同細(xì)胞耐受性不同，我們建議您在做批量實(shí)驗(yàn)前，可根據(jù)實(shí)際質(zhì)粒和細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率，分不同梯度量先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，摸索最佳 siRNA 和 YosiTrans R-100 的混合比例。優(yōu)化后可根據(jù)自身細(xì)胞情況具體用量。
•采用本品進(jìn)行轉(zhuǎn)染，RNA 用質(zhì)量(ug)進(jìn)行計(jì)量，對(duì)21nt 雙鏈的siRNA 來(lái)說(shuō)，1OD=3.0nmol=40ug。
•siRNA 等較短RNA 請(qǐng)參照表1 中siRNA 用量，mRNA、shRNA 等較長(zhǎng)RNA請(qǐng)參照表1 中mRNA 用量。
•如轉(zhuǎn)染后需要用Trizol 提取RNA，建議轉(zhuǎn)染后6 小時(shí)換液。
操作步驟 (不同的細(xì)胞已及轉(zhuǎn)不同面積的孔板操作起來(lái)略有不同，以 24 孔板 siRNA 轉(zhuǎn)染為例)
1.提前一天細(xì)胞種植 貼壁細(xì)胞：提前一天將細(xì)胞種植在24 孔板中，以轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度在30％左右為宜，轉(zhuǎn)染前全培養(yǎng)基總量為0.45ml。 
懸浮細(xì)胞：采用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，數(shù)量為常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)的1/3 進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。
2.轉(zhuǎn)染過(guò)程
⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA，加入無(wú)血清稀釋液，充分混勻，制成RNA稀釋液，終體積為25μl。
注意：無(wú)血清稀釋液建議采用OPTI-MEM、無(wú)血清DMEM 或1640。
⑵取1ul 的R100，然后加入24ul 無(wú)血清稀釋液體，充分混勻，制成R100 稀釋液，終體積為25μl。室溫靜置5 分鐘。
⑶將R100 稀釋液和RNA 稀釋液充分混合（可用振蕩器振蕩或用加樣器吹吸10 次以上）混合，室溫靜置15 分鐘。轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備完成。
⑷將50μl 轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加到有0.45ml 全培養(yǎng)基（可含10%血清和抗生素）的細(xì)胞上，混合均勻。
⑸轉(zhuǎn)染后6 小時(shí)觀察細(xì)胞狀態(tài)，如狀態(tài)良好可不必更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24-96小時(shí)得到結(jié)果。 
注意：
1.siRNA 轉(zhuǎn)染后，繼續(xù)培養(yǎng)24-72 小時(shí)在mRNA 水平得到結(jié)果，繼續(xù)培養(yǎng)24-96 小時(shí)在蛋白水平得到結(jié)果。mRNA 轉(zhuǎn)染后，根據(jù)需要在24 小時(shí)后得到結(jié)果。
2.由于血清和培養(yǎng)條件等差異，轉(zhuǎn)染后鏡下培養(yǎng)基中可能出現(xiàn)少量黑點(diǎn)狀沉淀，為轉(zhuǎn)染試劑和血清中蛋白結(jié)合產(chǎn)物，不影響轉(zhuǎn)染結(jié)果和細(xì)胞狀態(tài)，可通過(guò)換液除去。

4.優(yōu)化 由于RNA 序列差異、合成條件不同以及是否帶有熒光等標(biāo)記，決定了RNA 和轉(zhuǎn)染試劑在不同情況下會(huì)有不同的最佳條件，建議先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。下表列出了在24well 的優(yōu)化方案，供參考。 
RNA 濃度和轉(zhuǎn)染試劑量的優(yōu)化(24well)

根據(jù)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果，固定RNA(μg):轉(zhuǎn)染試劑量(μl)的比值，按培養(yǎng)器皿表面積比例應(yīng)用到其他培養(yǎng)容器。

本公司所有產(chǎn)品僅供科研使用