南京艾康全心分析檢測中心是一家集檢測、分析技術服務于一體的綜合性第三方檢測機構。艾康全心分析檢測中心目前擁有高分辨率400M的核磁共振波譜儀,全套Agilent系列的液質聯(lián)用儀、氣質聯(lián)用儀、高效液相儀、氣相色譜儀以及各種理化分析儀器等一系列大型分析儀器。

在一定的色譜操作條件下，色譜柱的柱效可用理論塔板數或理論塔板高度來衡量。一般說來塔板數愈多，或塔板高度愈小，色譜柱的分離效能愈好。我們來通過實驗告訴大家柱效是如何進行評價的。

 如何對柱效進行評價？

1、實驗儀器與試劑

儀器：高效液相色譜儀（帶自動進樣器，或配置微量進樣器）、分析天平。 

試劑：苯、萘、聯(lián)苯（均為分析純）、甲醇（色譜純）、純凈水。

2、實驗步驟

色譜條件：色譜柱：C18，4.6×150mm，5μm；流動相：甲醇-水（80：20，v/v）； 

檢測波長：254nm；流速：1mL·min-1；柱溫：30℃；進樣量：10μL。

3、操作步驟

（1）分別精密配制含苯、萘、聯(lián)苯濃度均為約1mg·mL-1的3份對照品溶液各10mL。

（2）分別精密吸取上述對照品溶液各2mL置于10mL容量瓶中，加流動相稀釋，并定容至刻度，搖勻，得到含苯、萘、聯(lián)苯的混合對照品溶液。

 （3）按照上述色譜條件操作，進樣，記錄色譜圖。

計算各色譜峰的理論塔板數及各峰間分離度。

如何提高HPLC柱效？

要提高液相色譜的效率可從以下幾方面入手。以下介紹了幾種國際上流行的測量和計算柱效值的方法。

1、提高液相色譜柱柱效的方法

（1）降低移動相的流速，但會使分析時間延長。

（2）減少固定相的量，但色譜柱中樣品的負載量也隨之減小。

（3）減小固定相的顆粒度，但不能過分，過分后色譜柱的滲透率也會減小。

（4）選用低粘度的移動相，以利于快速傳質，但卻不利于多組份分析。

（5）適當提高柱溫，可降低移動相的粘度，但柱效和分離度也隨之降低。

（6）盡量減小停滯移動相的體積，但卻加快了移動相的流速。

從以上介紹可看出，在色譜分析過程中，各種因素是互相聯(lián)系和制約的。只有通過對柱效值的跟蹤測算，對自己分析方法不斷的研究和實踐，才能找到工作條件。

2、對柱效值進行跟蹤測算應注意的問題

我們也應記住柱效值并不足以預測在所有條件下的柱性能，對大多數色譜工作者來說，柱性能指的是色譜柱用于特定分離的能力，而僅僅有高柱效并不能保證這種分離能力。

不管用什么特定的測試方法，都會有幾個參數影響柱效的測定。這些參數包括：洗脫液的成分和粘度及其線流速，測定塔板數所用的溶質、溫度、柱長、填料裝填方式、顆粒度，還有所選用的測量和計算方法。而測量和計算方法對柱效值的確定起著極大的作用。

3、幾種測量和計算柱效值的方法

因為色譜峰是假定樣品濃度在移動相和固定相中呈正態(tài)分布而得到的樣品譜帶分布,故常常把色譜峰型看作正態(tài)曲線來計算理論塔板數。因此計算柱效（以理論塔板數n為單位）的公式習慣上定義為：

式中tR為色譜峰的保留時間;σ2是以時間為單位測量色譜峰的偏差;a是和峰高（從測峰寬的基線量起）有關的常數,ωb是峰寬,表示由色譜峰頂點與色譜峰兩側拐點處做切線與峰底基線相交兩點間的距離。

4、結論

假如一個色譜峰真是正態(tài)峰型，那么每種計算方法都會得到同樣的結果。然而即使一些比較理想的儀器和傾向于得到對稱峰型的溶質，由于柱內的槽或空隙，也會出現非正態(tài)峰型。所以不同的計算方法將會得到相差較大的n值。通常偏離正態(tài)模型的峰型表示為“前延”或“拖尾”。對于這些峰型，越在峰的高處測量，計算的理論塔板數值就越大（準確性越低）。

在許多情況下，色譜工作者需要能反映整個峰型（包括拖尾）的柱效值,同時為了保證定量的重復性，也需要色譜峰很好的對稱性。這時對色譜峰非對稱性最敏感的計算方法適合。如果目的僅僅是要監(jiān)測色譜柱從di一次使用到使用壽命結束這一過程中的柱效，那么以上任何一種方法都可以,應選擇簡便的方法。

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