產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本試劑盒可用于檢測(cè)食品或其他材料中是否有南極小鱗犬牙魚源性成分。現(xiàn)代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性，  因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無(wú)法對(duì)食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。同時(shí)部分食材還有致敏性，因此基于基因檢測(cè)的快速靈敏的食材來(lái)源檢測(cè)技術(shù)將對(duì)食品監(jiān)管和安全提供重要的保障。本公司開發(fā)了簡(jiǎn)單快捷的南極小鱗犬牙魚源性成分探針?lè)晒舛?PCR 檢測(cè)試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2.提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

3.根據(jù)南極小鱗犬牙魚保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物和探針，能專一性地檢測(cè)出樣品中的  南極小鱗犬牙魚成分，但不能檢測(cè)其他非榛子成分。

4.對(duì)混合樣品中南極小鱗犬牙魚成分的檢測(cè)下限為 0.01%，對(duì)樣品中南極小鱗犬牙魚成分的核酸檢測(cè)下限為 0.1ng/µL。

5.既可以定性檢測(cè)，也可以定量檢測(cè)。用于定量時(shí)線性范圍至少有 5 個(gè)數(shù)量級(jí)。

6.提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

7.一管式閉管操作，降低了交叉污染。

8.快速，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程（按一個(gè)樣品計(jì)）所需時(shí)間僅為 2.0 小時(shí)。

9.南極小鱗犬牙魚源性成分探針?lè)╭PCR 試劑盒只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的熒光定量 PCR。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒，可滿足一定規(guī)模的檢測(cè)需求。

檢測(cè)方法

實(shí)時(shí)熒光PCR，具有快速、準(zhǔn)確、靈敏等優(yōu)點(diǎn)。

試劑盒成分

2×Probe qPCR MasterMix、熒光 PCR 專用模板稀釋液、超純水、南極小鱗犬牙魚源性成分qPCR 引物-探針干粉、南極小鱗犬牙魚源性成分qPCR 陽(yáng)性對(duì)照(1×10E7 拷貝/μL)、使用手冊(cè)。

自備試劑

樣品 DNA。

保存和運(yùn)輸

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 24 個(gè)月。

使用方法：

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能

污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原， 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2，1。

2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同）。

3.在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4.換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用

5.換槍頭，在 4 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E4 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用

6.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7.如果有 N 個(gè)樣品，最好設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng)性

對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用 10μL 上步所得 4 號(hào)稀釋液再加上一定量的水使總體積跟核酸制備試劑盒所要求的起始樣本體積  一樣，以此作為 PC。另外用水作為 NC。

8.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)樣品 DNA-提取試劑盒兼容。也可以選購(gòu)本公司的核酸-提取試劑。

三、Probe qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）

9.如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（直接用第 6 步第 4 號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10.在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)  置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好

后最后加）：

成分樣品管PCR 陰性標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管N+2 個(gè)對(duì)照（1-6 管）

2×Probe qPCR MasterMix各 10 μL10 μL各 10 μL

南極小鱗犬牙魚源性成分 qPCR

引物-探針混合液各 3 μL3 μL各 3 μL

N+2 個(gè)待測(cè) DNA 樣本各 7 μL不加不加

超純水不加7 μL不加

第 6 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液

（1-6 號(hào)）

不加

不加各 7μL（2 號(hào)樣

到 2 號(hào)管，3 號(hào)樣到 3 號(hào)管…）

11.蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR：

過(guò)程溫度時(shí)間

預(yù)變性95℃5 min

PCR 反應(yīng)

（45 個(gè)循環(huán)）95℃15 sec

60℃60 sec（采集 FAM 通道的熒光信

號(hào)，設(shè)置 BHQ 為淬滅基團(tuán)）

四、數(shù)據(jù)處理

12.如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。

13.如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照必須無(wú) Ct 或 Ct 大于或等于 40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線，Ct 值應(yīng)該小于 40，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。如果實(shí)驗(yàn)有效，則分析待測(cè)樣品，如果無(wú)Ct 或 Ct 大于或等于 40，則為陰性。如果 Ct 小于 40 則為陽(yáng)性。

選擇我們的南極小鱗犬牙魚源性成分探針?lè)╭PCR 試劑盒，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！