BE6018 甲醛脫氫酶試劑盒 輔酶Ⅰ系列-常備現(xiàn)貨
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號 BE6018
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2025/7/18 13:32:21
- 訪問次數(shù) 143
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BE6018 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 廣泛存在于原核和真核生物中,該酶能利用NAD+作為輔酶，將有毒的甲醛氧化 |
甲醛脫氫酶（Formaldehyde Dehydrogenase，FDH）試劑盒說明書
微量法 100T/96S
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：
甲醛是一種能與蛋白質(zhì)、核酸和脂類產(chǎn)生非特異性反應(yīng)的活潑化合物，對所有生物都具有很高毒性。甲醛脫氫酶作為含鋅中等鏈醇脫氫酶（ADH）的家庭成員之一，廣泛存在于原核和真核生物中，該酶能利用NAD+作為輔酶，將有毒的甲醛氧化，是甲醛氧化途徑中的關(guān)鍵酶。
測定原理：
甲醛脫氫酶催化甲醛和 NAD+產(chǎn)生NADH，在 340nm 處的吸光值會增加，測定 340nm 處的吸光值變化，可計算得到甲醛脫氫酶的活性。
甲醛脫氫酶試劑盒 輔酶Ⅰ系列-常備現(xiàn)貨
組成：
| 產(chǎn)品名稱 | BE6018-100T/96S | Storage |
| 提取液：液體 | 100ml | 4℃ |
| 試劑一：液體 | 15ml | 4℃ |
| 試劑二：粉劑 |
1 瓶 | -20℃ |
| 試劑三：粉劑 |
1 支 | -20℃ |
| 試劑四：液體 |
1.5ml 支 | 4℃避光 |
| 說明書 | 一份 | |
試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 6ml 水溶解待用，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑三：粉劑×1 支，4℃保存；臨用前加入 1.5ml 水溶解待用。
自備儀器和用品：
天平、離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96 孔板、蒸餾水。
FDH 提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃，離心 20min。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。
3. 液體：直接檢測。
測定操作表：
1、酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長至 340nm。
2、操作表
在 96 孔板中加入如下試劑
| 測定管 | |
| 樣本（µl） | 20 |
| 試劑一（µl） | 110 |
| 試劑二（µl） | 50 |
| 試劑三（µl） | 10 |
| 試劑四（µl） | 10 |
混勻，于 340nm 下測定初始吸光值A1 與 5min 后的吸光值A2，△A=A2-A1。若樣本數(shù)量較多，可將試劑按比例配成工作液使用。
FDH 酶活計算：
（1） 按蛋白濃度計算
酶活定義：每毫克蛋白每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個酶活單位。
FDH 酶活（nmol/min/mg prot）=
（2） 按樣本質(zhì)量計算
DA ×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T = 643×△A÷Cpr e´ d
酶活定義：每克樣品每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個酶活單位。
FDH 酶活（nmol/min/g 鮮重）=
（3） 按照細(xì)胞數(shù)量計算
DA ×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）÷T =643×△A÷W e´ d
酶活定義：每 104 個細(xì)胞每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個酶活單位。
FDH 酶活（nmol/min/104cell）=數(shù)量
（4） 按液體體積計算
DA ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬個））÷T= 643×△A÷細(xì)胞 e´ d
酶活定義：每ml 樣本每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個酶活單位。
FDH 酶活（nmol/min/ml）=DA ×V 反總÷V 樣÷T=643×△A e´ d
e：NADH 微摩爾消光系數(shù)，6.22×10-3 L/µmol/cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；V 反總：反應(yīng)體系總體積， 0.2ml；V 樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.02ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T，反應(yīng)時間，5min；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g
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