產(chǎn)品簡介：

石蠟包埋切片是珍貴的分子生物學(xué)研究材料，但是其保存時間一般都比較長，很不容易從中提取到可以進(jìn)行 RT-PCR 的 RNA 樣本，存在的主要問題是 RNA 的降解和脫蠟過程中樣品的丟失。本產(chǎn)品是專門開發(fā)的、用于從石蠟包埋切片中快提 RNA 的試劑。

產(chǎn)品特點：

1.一管式操作，避免了可能的交叉污染和樣品 RNA 的丟失。

2.適用于甲醛固定和非甲醛固定的兩類切片。

3.含一步離心式脫蠟試劑，不需要使用有毒的二甲苯，健康環(huán)保。

4.沉淀法，比過柱法和磁珠法能更好的回收高度降解的 RNA 片段。

5.能有效去除基因組 DNA 的污染，避免 DNA 的干擾。

6.得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR 反應(yīng)。

7.本產(chǎn)品足夠 30 次微量提取，每次可以處理 5 片切片。

8.石蠟包埋切片 RNA 純化試劑盒（沉淀法）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

規(guī)格及成分

保存和運輸

常溫運輸和保存，RNA 提取液需 4℃保存，蛋白裂解液需要-20℃放置。有效期一年。

自備試劑

氯仿、75%乙醇。

使用方法：

1.將 5 片厚度為 6-8 μm 的石蠟包埋切片轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 塑料離心管(最好使用螺旋蓋離心管)中并加入 1 mL 石蠟包埋切片 RNA 純化溶液 A，在振蕩器上以最大速度振蕩10 秒。

2.加入 75 μL 石蠟包埋切片RNA 純化溶液 B，在振蕩器上以最大速度振蕩 10 秒。

3.7,000×g 室溫離心 2 分鐘，溶液將形成上下兩個相，其中組織切片位于下層。

4.小心吸棄上層液體。

5.將離心管放入真空離心機中抽干下層的液體，一般需要一小時。

6.加入 150 μL 蛋白裂解液，55℃保溫過夜。

7.短暫離心，95℃保溫 10 分鐘。

8.加入 0.5 mL RNA 提取液，充分震蕩半分鐘。

9.加入 0.1 mL 自備氯仿，振蕩器上充分振蕩混均 30 秒。

10. 13,000-5,000×g 室溫離心 3-5 分鐘。

11.將上清液（約 0.6 mL）轉(zhuǎn)移到另一干凈的 1.5 mL 塑料離心管中。下層有機相（藍(lán)色）和中間層含有 DNA 和蛋白質(zhì)，避免觸及，否則將產(chǎn)生蛋白質(zhì)和 DNA 污染。為保險起見，可以留下 100 μL 上清液不取。同時吸取上清時最好緩慢進(jìn)行，否則容易吸出交界面的不可見的 DNA。

12.在上清液中加入兩倍體積的微量核酸沉淀劑，振蕩器上振蕩 30 秒混勻。

13.14,000×g 室溫離心 5 分鐘，離心底的側(cè)面將形成 RNA 沉淀。如果需要提高 RNA

回收率，可以將離心時間延長到 20 或 30 分鐘。

14.小心吸棄上清液，注意不要吸棄 RNA 沉淀。

15.在含 RNA 沉淀的離心管中加入 1 mL 自備的 75%乙醇，振蕩混勻 30 秒。

16.14,000×g 室溫離心 1 分鐘。

17.小心吸棄上清液，注意不要吸棄 RNA 沉淀。

18.短暫快速離心，用移液槍小心吸棄殘留乙醇(約 50 μL)。注意不要吸棄沉淀。此步十分重要，否則殘留的乙醇會影響 RNA 的使用。

19.室溫放 1-2 分鐘后立即加入 50 μL RNase-free 水使 RNA 沉淀溶解。千萬不要用真空離心法使 RNA 沉淀過于干燥，否則 RNA 將變得十分難溶。樣品立即使用或存放于-80℃待用。

20.RNA 完整性的電泳檢測：

21.RNA 產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將 5-10 μL RNA 溶于TE 緩沖液中(pH 7.5-8.2 之間)檢測其在 OD260 的光吸收。通過光吸收可以得出 RNA 濃度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL），進(jìn)而計算出RNA 的產(chǎn)量（濃度×體積)和產(chǎn)率(RNA 產(chǎn)量/組織用量)。

22.RNA 純度測定：無污染的總 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之間(具體數(shù)

值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響 RT-PCR 等反應(yīng)。

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