產(chǎn)品名稱：大黃魚腎細(xì)胞；PCK

產(chǎn)品類別：其他細(xì)胞系

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)體系：DMEM（高糖）+10%FBS，28°或者21°培養(yǎng)

傳代方法 ：1：2傳代

凍存條件：無血清細(xì)胞凍存液

規(guī)格：1×10^6cells/T25培養(yǎng)瓶

貨號：YS-01X8562

同工酶

染色體

使用權(quán)限 A類

大黃魚腎細(xì)胞；PCK培養(yǎng)操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時(shí)，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-cRaf/Raf1(c-raf 1) /FITC 熒光素標(biāo)記抗cRaf/Raf1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-KT3 tag/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記KT3 tag標(biāo)簽抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CCDC157 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白157抗體 規(guī)格 0.2ml

GRM2/GLUR2 (Glutamate Receptor Metabotropic 2) 促代謝型谷酸受體2抗原 0.5mg

HECW1 英文名稱： 肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白HECW1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Smad3 細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD3抗體 規(guī)格 0.1ml

Anti-KT3 tag/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記KT3 tag標(biāo)簽抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
IL-6R Alpha (IL6R-alpha) 白細(xì)胞介素6受體α抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-Adducin protein 內(nèi)收蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-cdc25C (Ser216) 磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25C抗體 規(guī)格 0.1ml

非水溶性封 10ml 使用后組織收縮較明顯

WBP2 英文名稱： WBP2蛋白抗體 0.2ml

DDX23 英文名稱： 三磷酸腺苷依賴解旋酶DDX23抗體 0.2ml

Anti-Adducin protein 內(nèi)收蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rabbit Anti-human IgG/Streptavidin 鏈霉親和素標(biāo)記兔抗人IgG 0.1ml

LR8 英文名稱： 跨膜蛋白TMEM176B抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh DIS3L2 有絲分裂控制蛋白樣DIS3L2抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-Clostridium perfringens type D/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗D型產(chǎn)氣莢膜梭菌抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
sPL-A2(Human soluble Phospholipase A2) ELISA Kit 人可溶性磷脂酶A2Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-NQO1 醌氧化還原酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh IGSF10 免疫球蛋白超家族成員10抗體 規(guī)格 0.2ml

ENA-Ab(Human anti-extractable nuclear antigen antibody) ELISA Kit 人抗可提取核抗原抗體 96T

PALM3 英文名稱： PALM3抗體 0.1ml

Camk1g 英文名稱： 鈣/鈣調(diào)蛋白依賴蛋白激酶IG抗體 0.1ml

Anti-NQO1 醌氧化還原酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml