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化工儀器網>產品展廳>試劑標物>行業(yè)專用試劑>生化與分子生物學用試劑>42115 TOPO-TASimpleLightningCloningKitTOP...

42115 TOPO-TASimpleLightningCloningKitTOPO載體

具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
  • 品牌 NobleRyder/諾博萊德
  • 型號 42115
  • 產地 北京
  • 廠商性質 經銷商
  • 更新時間 2025/7/17 19:18:34
  • 訪問次數(shù) 132

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北京諾博萊德科技有限公司始創(chuàng)于2012年,總部位于北京海淀區(qū),專注于科研生物領域,是一家研發(fā)、銷售和服務于一體的企業(yè)。公司秉承“誠信為本,博采眾長”的發(fā)展理念,致力于為科研工作者提供高質量的生物產品和服務。

諾博萊德的產品覆蓋面廣泛,包括以下

生化試劑:抗生素、蛋白質、染色劑、培養(yǎng)基、緩沖試劑、對照品、標準品、磁珠;

即用型試劑:常規(guī)試劑溶液、即用型染色液、免疫學試劑、細胞生物學、分子生物學、檢測試劑盒、細胞分離液人或其他動物細胞;

通用耗材:移液管/架、吸頭、槍頭、移液器、離心管/盒/架、PCR耗材、濾紙、口罩手套、冷/凍存管/盒、培養(yǎng)板/皿/瓶、蓋/載玻片、刀片、包埋盒/框、封片劑、石蠟、鏡油等產品被國內科研工作者廣泛應用。

 

生化試劑,即用型試劑,分子生物學,細胞生物學

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 20次/80次/20次(含感受態(tài))/80次(含感受態(tài))
貨號 生化試劑 應用領域 環(huán)保,化工,生物產業(yè),農林牧漁,制藥/生物制藥
主要用途 TOPO-TA Simple Lightning Cloning Kit

TOPO-TA Simple Lightning Cloning Kit

(不含酶切位點)

TOPO-TASimpleLightningCloningKitTOPO載體


目錄號42115

產品內容:

產品成份

42115-20 (20 rxn)

42115-80(80 rxn)

pTOPO-TA/Blunt Vector(30ng/ul)

20 ul

80 ul

1000bp Control (30ng/ul)

5 ul

5 ul

10x Enhancer

20 ul

80 ul

保存條件:

-20℃,存放 12 個月,不影響使用效果。

產品簡介:

可在室溫條件下,20分鐘完成TA克隆或Blunt克隆,陽性率接近100%,并且免冰浴、免熱激、免藍白斑篩選,還可以連接長達10kbDNA片段。

克隆步驟(≤3kb 片段               簡化步驟(≤10kb 片段-- 免復蘇,免液體 LB

1、連接:室溫 5 分鐘;                      1、連接: 37℃連接 5 min。

2、轉化:室溫 5 分鐘;                      2、轉化:冰浴 5 min42℃熱激 1 min,冰上 2 min

3、復蘇:180rpm、37℃振蕩培養(yǎng) 10 分鐘;涂板。 3、取全部菌液涂板,37℃倒置培養(yǎng)。

操作步驟:

1.         PCR 產物的制備:

a.       引物要求:引物不能磷酸化。

b.     酶的選擇:根據(jù)需要選擇DNA 聚合酶,該載體兼容PCR 產物的A 末端和平末端。

c.        電泳檢測 PCR 產物的量和質量:

①僅有目的條帶,可直接進行連接反應,無需純化;

②如果有多條帶,建議凝膠回收 DNA 片段(DC011-100;

③如果以質粒為模板的擴增,則必須進行凝膠回收,因為模板質粒也會長出非目的菌落。

2.         連接反應:

1) {C}室溫(20-37℃)建立連接體系(10ul 體系):

純化后的 PCR 產物

0.5-8ul

pTOPO-TA/blunt Vector

1ul

10 ? Enhancer

1 ul

滅菌水

X ul

總體積

10 ul

不同大小插入片段的推薦用量:

插入片段大?。╞p)

最佳用量(ng)

100-1000

10-40

1000-2000

40-80

2000-5000

80-150

加完試劑后,輕彈管底混勻(或輕輕吹打混勻,點甩離心收集所有液體在離心管底。

2) 室溫(20-37℃)連接 5 分鐘。連接產物可直接轉化感受態(tài)細胞,或置于冰上備用。

3.         轉化、復蘇、涂板:

1100ul 感受態(tài)細胞,置于室溫解凍(約 1 分鐘左右),輕撣幾次將細胞均勻懸浮。

2)      加入 10ul 連接液,輕輕混勻,室溫(20-37℃)放置 5 分鐘。

3)    加入 500ul 平衡至室溫的 LB 或者 SOC 培養(yǎng)基(不含抗生素),37℃ 180 rpm 振蕩培養(yǎng) 10 min

注意:大于 3kb 的片段,振蕩培養(yǎng)時間延長至 30-60 分鐘,可以增加轉化子。或者用簡化步驟

4)        取 200?l 菌液涂板(含氨芐青mei素 50-100ug/ml),培養(yǎng)過夜。(為得到較多克隆,4000 rpm 離心 1 min,吸棄掉部分上清,保留 100-150ul,輕彈懸浮菌體,取全部菌液涂板)

注意:如果使用 5ul 體系,各成分按照比例減半,使用次數(shù)可以加倍。

4.         轉化子的篩選鑒定:

本制品陽性率相當高,一般情況下,可以達到所見即所得,只要是長出來的菌落正常(不是污染的雜菌,轉化子數(shù)量也不算太少,基本就包含插入。因此插入片段不超過 2-3kb 的情況下可以不用鑒定直接挑 1-2 個菌去測序。

1)   菌落 PCR 檢測:挑單菌落于 10ul 無菌水中,混勻,取 1ul 置于 25ul PCR 體系,用 PCR 引物或者M13 通用引物去鑒定陽性克隆。

        2)    用通用 M13F-20/M13R-26引物測序來確定是否含有目的克隆。


TOPO-TASimpleLightningCloningKitTOPO載體



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