土壤多酚氧化酶（Solid-Polyphenol oxidase，S-PPO）試劑盒說明書

微量法 100 管/96 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

S-PPO 主要來源于土壤微生物、植物根系分泌物及動植物殘體分解釋放，催化土壤中芳香族化合物氧化成醌，醌與土壤中蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、礦物等物質(zhì)反應(yīng)生成有機質(zhì)和色素，完成土壤芳香族化合物循環(huán)，用于土壤環(huán)境修復(fù)。

測定原理：

S-PPO 能夠催化鄰苯三酚產(chǎn)生有色物質(zhì)，后者在 430nm 有特征光吸收。

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試劑組成和配制：

試劑一：粉劑×2 瓶，4℃保存；臨用前取一瓶，加入 7ml 蒸餾水充分溶解后待用；用不完的試劑 4℃保存一周。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、yi醚 50ml（不允許快遞）和蒸餾水。

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干，過 30~50 目篩。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 430nm，蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表：

振蕩混勻，30℃恒溫培養(yǎng) 1 h

振蕩數(shù)次，室溫靜置 30min，取 200μl 上層液于 430nm 處測定吸光值A。

注意事項:

1、因yi醚粘度小，易掉液，吸取前需先將槍頭在上層液里潤洗 2~3 次，再轉(zhuǎn)移測定；

2、yi醚易揮發(fā)，轉(zhuǎn)移到 96 孔板后立即測定，最好一個一個測定）。

S-PPO 活力計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 8.97x -0.003；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/ml），y 為吸光值A。單位的定義：每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1mg 紫色沒食子素定義為一個酶活力單位。

S-PPO 活力（mg /d/g 土樣）＝(A+0.003) ÷8.97×V 反總÷W÷T=80×(A+0.003)

T：反應(yīng)時間，1h=1/24d； V 反總：反應(yīng)體系總體積 0.6ml；W：樣本質(zhì)量，0.02g。

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 4.485x -0.003；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/ml），y 為吸光值A。單位的定義：每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1mg 紫色沒食子素定義為一個酶活力單位。

S-PPO 活力（mg/d/g 土樣）＝(A+0.003) ÷4.485×V 反總÷W÷T=160×(A+0.003)

T：反應(yīng)時間，1h=1/24d； V 反總：反應(yīng)體系總體積 0.6ml；W：樣本質(zhì)量，0.02g。

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