BP6003 異檸檬酸裂解酶試劑盒 其他系列-常備現(xiàn)貨
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號(hào) BP6003
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2025/7/17 21:39:47
- 訪問次數(shù) 83
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/48S |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | BP6003 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 通過乙醛酸循環(huán)及其他過程將脂肪轉(zhuǎn)變成碳水化合物。ICL 是乙醛酸循環(huán)的關(guān)鍵酶之一 |
異檸檬酸裂解酶（isocitrate lyase，ICL）試劑盒說明書
分光光度法 50 管/48 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：
ICL（EC4.1.3.1）主要存在于植物和微生物中，油料作物種子在萌發(fā)過程中，通過yi醛suan循h(huán)uan及其他過程將脂肪轉(zhuǎn)變成碳水化合物。ICL 是乙醛酸循環(huán)的關(guān)鍵酶之一。
測(cè)定原理：
ICL 催化異檸檬酸降解為乙醛酸和琥珀酸，乙醛酸和 NADH 在LDH 的作用下生成乙醇和NAD，NADH在 340nm 下有特征吸收峰，監(jiān)測(cè) 340nm 吸光度的減小速率可間接反應(yīng)ICL 活性。
異檸檬酸裂解酶試劑盒 其他系列-常備現(xiàn)貨
試劑組成和配制：
產(chǎn)品名稱 | BP6003-50T/48S | Storage |
提取液：液體 | 50ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 15ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 15ml | 4℃ |
試劑三：粉劑 | 3 瓶 | -20℃ |
試劑四：粉劑 | 3 瓶 | -20℃ |
試劑五：液體 | 800μl×2 | 4℃ |
試劑六：f 粉劑 | 3 瓶 | 4℃ |
說明書 | 一份 | |
試劑三：粉劑×3 瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入 5ml 蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試劑仍-20℃保存；
試劑四：粉劑×3 瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入 5ml 蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
試劑五：液體 800μl×2 支，4℃保存；臨用前每支加入 560μl 蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試劑仍4℃保存；
試劑六：粉劑×3 瓶，4℃保存；臨用前每瓶加入 5ml 蒸餾水，充分混勻待用。用不完的試劑-20℃保存。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、1ml 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水
樣本的前處理：
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；15000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 570nm，蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表(在 1.5ml 棕色EP 管中按下表依次加樣）：
試劑 | 測(cè)定管 |
試劑一（μl） | 300 |
試劑二（μl） | 250 |
試劑三（μl） | 300 |
試劑四（μl） | 300 |
試劑五（μl） | 20 |
樣本（μl） | 50 |
 |
混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 5min
將上述試劑按順序加入 1 ml 玻璃比色皿中，加試劑六的同時(shí)開始計(jì)時(shí)，在 340nm 波長下記錄 20 秒時(shí)的初始吸光度A1 和 2 分 20 秒時(shí)的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A1-A2。
注意：
若一次性測(cè)定樣本較多，可將試劑一、二、三、四、五和樣本按比例配成混合液，在 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 5min 以上，測(cè)定時(shí)加入 1220μl 混合液和 300μl 試劑六測(cè)定。
ICL 活性計(jì)算：
（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg 組織蛋白中每分鐘消耗 1 nmol 的NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
ICL（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=2443×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
ICL（nmol/min /g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=2443×ΔA÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
ICL（nmol/min /104 cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=4.886×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，1.52×10-3 L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.05 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。
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