蛋白質(zhì)分子量測(cè)定：你應(yīng)該遵循的10個(gè)步驟（二）檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

dànbáizhì分子量（Molecular Weight, MW）是揭示其結(jié)構(gòu)、功能和復(fù)合物組裝狀態(tài)的重要參數(shù)。無論是確認(rèn)重組蛋白表達(dá)是否正確，還是驗(yàn)證蛋白復(fù)合體的亞基組成，準(zhǔn)確的分子量測(cè)定都是關(guān)鍵步驟。本文將系統(tǒng)梳理dànbáizhì分子量測(cè)定的10個(gè)核心步驟，幫助科研人員優(yōu)化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，提高數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。

dìyī步：明確測(cè)定目的與蛋白特性

不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄈ珧?yàn)證表達(dá)、篩選修飾、研究相互作用）對(duì)應(yīng)不同測(cè)定策略。建議提前了解蛋白的理論分子量、是否含有標(biāo)簽、預(yù)期的聚集狀態(tài)，以及是否可能存在糖基化、磷酸化等修飾。

第二步：選擇合適的測(cè)定方法

常見dànbáizhì分子量測(cè)定方法包括：

• SDS-PAGE：基于電泳遷移率估算蛋白分子量，適合初篩和表達(dá)檢測(cè)，但對(duì)修飾蛋白或聚合體存在一定誤差。

• 凝膠過濾色譜（SEC）：適用于分析蛋白的聚集狀態(tài)或復(fù)合物組成，若結(jié)合多角度光散射（MALS）可提高分子量評(píng)估準(zhǔn)確性。

• 質(zhì)譜法（MS）：具備高靈敏度和高分辨率，適用于jīngquè測(cè)定蛋白分子量，尤其在分析修飾、異構(gòu)體或復(fù)雜蛋白方面優(yōu)勢(shì)顯著。

在百泰派克生物科技，我們提供從SDS-PAGE初篩到高分辨質(zhì)譜jīngquè測(cè)定的一站式服務(wù)，滿足不同研究需求。

第三步：蛋白樣品的準(zhǔn)備與純化

高純度的蛋白樣品是jīngzhǔn測(cè)定的前提。建議采用Ni-NTA親和純化、SEC等方式去除雜蛋白，避免影響測(cè)定結(jié)果。對(duì)于質(zhì)譜分析，需進(jìn)一步脫鹽、去除緩沖鹽或甘油等干擾成分。

第四步：估算理論分子量

使用ExPASy ProtParam等在線工具，根據(jù)dànbáizhì氨基酸序列快速計(jì)算理論分子量（考慮標(biāo)簽與信號(hào)肽）。此值將作為實(shí)驗(yàn)結(jié)果的參照。

第五步：驗(yàn)證蛋白是否為單體

對(duì)于功能相關(guān)研究，判斷蛋白是否以單體或復(fù)合物存在至關(guān)重要。可通過原位質(zhì)譜、SEC-MALS 或冷凍電鏡數(shù)據(jù)進(jìn)行驗(yàn)證。

第六步：選擇適配的質(zhì)譜模式

• ESI-MS（電噴霧質(zhì)譜）：適合大分子分析，靈敏度高。

• MALDI-TOF MS：適合高通量篩查，特別是在蛋白修飾篩查中應(yīng)用廣泛。

不同模式對(duì)樣品濃度、緩沖體系、帶電狀態(tài)有不同要求，建議根據(jù)蛋白特性調(diào)整上機(jī)參數(shù)。

第七步：優(yōu)化儀器參數(shù)與上樣策略

控制進(jìn)樣流速與濃度，避免多聚體干擾

• 對(duì)于LC-MS，使用低鹽緩沖體系，適配LC柱類型

• 對(duì)于MALDI，選用合適的基質(zhì)（如sinapinic acid）增強(qiáng)信號(hào)

第八步：數(shù)據(jù)解析與分子量計(jì)算

使用zhuānyè軟件（如BioPharma Finder、MaxQuant、FlexAnalysis）進(jìn)行譜圖分析。對(duì)照理論分子量，判斷是否存在修飾、降解、剪切等現(xiàn)象。

第九步：結(jié)果驗(yàn)證與交叉驗(yàn)證

建議使用兩種以上方法進(jìn)行交叉驗(yàn)證（如SDS-PAGE結(jié)合質(zhì)譜），提高dànbáizhì分子量測(cè)定數(shù)據(jù)可靠性。特別是在新蛋白表達(dá)、結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究中尤為重要。

第十步：歸檔與數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化

將實(shí)驗(yàn)流程、參數(shù)設(shè)定、質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)和分析結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化歸檔，不僅便于后期重復(fù)實(shí)驗(yàn)，也有利于成果發(fā)表與zhuānlì申請(qǐng)。

科學(xué)、jīngzhǔn、可復(fù)現(xiàn)是關(guān)鍵，dànbáizhì分子量測(cè)定不僅是一個(gè)技術(shù)過程，更關(guān)乎研究的可靠性和可重復(fù)性。從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)到數(shù)據(jù)解讀，每一步都值得嚴(yán)謹(jǐn)對(duì)待。在百泰派克生物科技，我們?nèi)诤细叻直尜|(zhì)譜平臺(tái)（如Orbitrap、Q-TOF）與zhuānyè數(shù)據(jù)分析團(tuán)隊(duì)，為您提供高準(zhǔn)確度的dànbáizhì分子量測(cè)定服務(wù)，支持從基礎(chǔ)研究到新藥開發(fā)的多維應(yīng)用。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，N端測(cè)序，C端測(cè)序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

蛋白質(zhì)分子量測(cè)定：你應(yīng)該遵循的10個(gè)步驟（二）檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹