Edman降解的工作流程檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

在dànbáizhì組學(xué)飛速發(fā)展的jīntiān，質(zhì)譜（Mass Spectrometry, MS）已成為主流蛋白測(cè)序手段。然而，Edman降解（Edman degradation）作為一種經(jīng)典的Nduāncèxù技術(shù)，依舊在特定場(chǎng)景中具有bùkětìdài的價(jià)值。尤其是在確認(rèn)dànbáizhìN端修飾、驗(yàn)證重組蛋白表達(dá)正確性或新型肽段結(jié)構(gòu)鑒定方面，Edman降解以其直接、jīngquè的特性發(fā)揮著dútè作用。

什么是Edman降解？

Edman降解是一種基于化學(xué)反應(yīng)的順序性氨基酸切除方法，用于從多肽鏈N端開(kāi)始逐個(gè)識(shí)別氨基酸殘基。其原理由Pehr Edman于1950年提出，并迅速成為20世紀(jì)dànbáizhì一級(jí)結(jié)構(gòu)研究的重要工具。

Edman降解的標(biāo)準(zhǔn)工作流程

Step 1：樣品準(zhǔn)備（Sample Preparation）

• 樣本要求：高純度、多肽鏈長(zhǎng)度通常在30個(gè)氨基酸以?xún)?nèi)，N端未被修飾（如乙?；蜃钄啵?/p>

• 固定方式：通常將肽鏈通過(guò)共價(jià)鍵固定于固相載體（如PVDF膜），以便后續(xù)循環(huán)操作。

Step 2：N端氨基酸標(biāo)記（Labeling）

• 使用苯異硫氰酸酯（PITC, phenylisothiocyanate）與N端氨基酸發(fā)生反應(yīng)，形成PTH-氨基酸衍生物。

• 該反應(yīng)在堿性條件下進(jìn)行，通?？刂圃趐H 9.0左右，以促進(jìn)高效衍生化。

Step 3：選擇性裂解（Cleavage）

• 在酸性條件（如三fúyǐsuān存在下）下，斷裂N端氨基酸與多肽主鏈之間的肽鍵。

• 此步驟不會(huì)破壞剩余肽鏈，確保反應(yīng)具有高度順序性和循環(huán)性。

Step 4：PTH-氨基酸鑒定（Identification）

• 所得到的PTH-氨基酸通過(guò)高效液相色譜（HPLC）或毛細(xì)管電泳進(jìn)行分離和鑒定。

• 每一個(gè)氨基酸都有dútè保留時(shí)間，便于與標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)，完成定性分析。

Step 5：循環(huán)執(zhí)行（Cycle Repetition）

• 剩余肽鏈重復(fù)步驟2-4，每一輪提取一個(gè)N端氨基酸，直到多肽鏈長(zhǎng)度耗盡或信號(hào)減弱至無(wú)法檢測(cè)。

• 通常Edman降解可穩(wěn)定進(jìn)行15–20輪，但在高質(zhì)量樣本與zhuānyè操作下，也能延伸至30個(gè)殘基以上。

Edman降解的優(yōu)勢(shì)與局限

? 優(yōu)勢(shì)

• N端專(zhuān)一性強(qiáng)：對(duì)肽鏈起始?xì)埢兄苯訙y(cè)序能力，適用于抗體、激素、信號(hào)肽驗(yàn)證等場(chǎng)景；

• 無(wú)需復(fù)雜數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)：不同于MS，Edman降解直接輸出序列，避免算法偏差；

• 適合小分子肽段分析：尤其適合30個(gè)氨基酸以?xún)?nèi)的結(jié)構(gòu)解析。

??局限

• N端修飾限制：如N-乙?；?、N-甲酰化等會(huì)阻斷反應(yīng)；

• 效率遞減：隨著循環(huán)次數(shù)增加，背景噪音加劇，測(cè)序精度下降；

• 不適用于混合樣本：多組分混雜時(shí)難以區(qū)分PTH-產(chǎn)物來(lái)源。

應(yīng)用實(shí)例

在單克隆抗體開(kāi)發(fā)過(guò)程中，Edman降解常被用于：

• 驗(yàn)證重組抗體的N端一致性；

• 確認(rèn)Fab段、Fc段是否表達(dá)正確；

• 輔助質(zhì)譜結(jié)果，增強(qiáng)結(jié)構(gòu)確認(rèn)的可靠性。

?特別是在質(zhì)譜未能明確區(qū)分N端修飾種類(lèi)時(shí)，Edman降解可提供關(guān)鍵佐證信息。

盡管質(zhì)譜已成為dànbáizhì測(cè)序主流，但Edman降解作為經(jīng)典化學(xué)方法，依舊在結(jié)構(gòu)確認(rèn)、N端修飾驗(yàn)證等領(lǐng)域扮演著bùkětìdài的角色。選擇合適的測(cè)序策略，結(jié)合zhuānyè服務(wù)平臺(tái)，是實(shí)現(xiàn)高質(zhì)量科研或產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的關(guān)鍵。百泰派克生物科技整合經(jīng)典Edman測(cè)序與現(xiàn)代質(zhì)譜手段，為蛋白結(jié)構(gòu)解析提供多維解決方案。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上先進(jìn)的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)先進(jìn)，填補(bǔ)技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題。可在單細(xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專(zhuān)有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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