【摘要】：熱休克蛋白70（HSP70）是一種結(jié)構(gòu)高度保守的多肽，屬于熱休克蛋白家族，主要由α螺旋和β折疊構(gòu)成，具有“片段化”的特點(diǎn)。其分子量約為70kDa，但存在分子量為68、72、73、75、78kDa等的20多種蛋白，均屬于HSP70家族。HSP70能夠通過易化變性蛋白的修復(fù)，幫助新合成的多肽鍵的生理折疊與伸展，以及糾正多肽鏈的錯(cuò)誤折疊等途徑，使細(xì)胞的功能和結(jié)構(gòu)得到恢復(fù)。它參與蛋白質(zhì)從合成到降解的所有生命過程，在蛋白質(zhì)合成過程中的正確折疊、蛋白質(zhì)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)以及多蛋白復(fù)合物的組裝中起著重要作用。

檢測原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被熱休克蛋白70（HSP-70）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的熱休克蛋白70（HSP-70）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

試劑的準(zhǔn)備：

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法：

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.  自動洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

牛熱休克蛋白70ELISA試劑盒 靈敏度高需要但未提供的材料及耗材：

  1、酶標(biāo)儀

2、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水

4、洗瓶或者自動洗板機(jī)

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、500ml量筒

7、無粉一次性乳膠手套

牛熱休克蛋白70ELISA試劑盒 靈敏度高常見問題解答：

為了幫助您更好的解決在實(shí)驗(yàn)中可能碰到的各種問題，上海軒澤康生物設(shè)計(jì)了這些問題指導(dǎo)，配以試劑盒內(nèi)的說明書一起供您參考使用：

1.     問：ELISA試劑盒是否可以分批使用？

上海軒澤康生物解析：可以分批使用，試劑盒內(nèi)酶標(biāo)板都是可拆卸的。

2.     問：ELISA實(shí)驗(yàn)整個(gè)過程需要多久？

上海軒澤康生物解析：從實(shí)驗(yàn)方法來看，雙抗體夾心法實(shí)驗(yàn)需要約3.5~4小時(shí)，競爭法實(shí)驗(yàn)需要2-2.5小時(shí)。這個(gè)時(shí)間是單純的上機(jī)時(shí)間，不包括樣本采集時(shí)間和樣本處理時(shí)間。

3.     問：說明書上的檢測限不適用怎么辦？

上海軒澤康生物解析：我們的試劑盒檢測限都是根據(jù)常規(guī)樣本定標(biāo)，如遇低于檢測限的特殊樣本可以聯(lián)系我司客服咨詢定制檢測限。

4.     問：為什么建議樣本和標(biāo)曲做復(fù)孔？

上海軒澤康生物解析：①求平均值，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。②防止跳孔。③對自己的操作進(jìn)行評估。④對試劑盒性能進(jìn)行評估。

5.     問：樣本反復(fù)凍融對ELISA測試結(jié)果有影響嗎？

上海軒澤康生物解析：盡量避免反復(fù)凍融，收集處理完樣本后分裝冷凍。多次凍融易引起蛋白降解，測試出值水平下降，相對趨勢減小。

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