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P73680 pCMV-Usp9x(mouse)-3×HA-Neo

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專注細胞,載體質粒,耐藥株,慢病毒(過表達,干擾)包裝、穩(wěn)轉株構建,基因敲除、敲入等實驗服務 

載體 細胞 載體構建 穩(wěn)轉細胞株 病毒包裝

供貨周期 兩周 規(guī)格
貨號 P73680 應用領域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產業(yè),制藥/生物制藥
主要用途 僅供科研

名稱pCMV-Usp9x(mouse)-3×HA-Neo
別稱NM_009481.3;5730589N07Rik; Dffrx; FAF-X; Fafl
基因長7662bp
質粒宿主哺乳細胞
質粒用途蛋白表達
片段類型ORF
片段物種小鼠
原核抗性Amp
篩選標記Neo/G418
啟動子CMV
復制子pUC
感受態(tài)BL21(DE3)
溫度37度
背景載體pCMV-MCS-3×HA-Neo
正向引物CMV-F
反向引物WPRE-R

 


注意事項:轉化前請準確查找該質粒相應的抗生素名稱、抗生素使用濃度、感受態(tài)名稱和培養(yǎng)溫度。


1
、收到質粒干粉后請先5000rpm離心1min,再加入20μl~50μl無菌水或 pH8.0  1*TE緩沖液來溶解質粒,室溫放置1min

2
、從-80冰箱中取出相應的感受態(tài),置于冰盒上解凍,并做好標記;

3
、取2μl質粒加至100μl感受態(tài)中,冰浴30min

4
、42熱激90s,再冰浴2min

5
、加入900μl無抗的LB液體培養(yǎng)基,180rpm震蕩培養(yǎng)45min;

6
6000rpm離心5min,僅留100ul上清混勻菌體沉淀;

7
、混勻后的菌液加至對應抗性的LB平板上,倒入適量玻璃珠,涂勻液體;

8
、將平板正向培養(yǎng)1h,再倒置培養(yǎng)12h~16h

9
、挑取單克隆菌落至對應抗性的LB液體培養(yǎng)基中,震蕩培養(yǎng)12h~16h,根據(jù)實驗需要提取質粒




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