Human Colorectal Cancer Organoid Kit Plus

人結(jié)直腸癌類器官培養(yǎng)基套裝Plus

1、 產(chǎn)品描述

?；锶私Y(jié)直腸癌類器官培養(yǎng)基套裝Plus（Human Colorectal Cancer Organoid Kit Plus）是一種化學(xué)定義的細胞培養(yǎng)基，用于建立和維持人結(jié)直腸癌類器官。病人來源的腫瘤類器官概括了原始腫瘤的基因組和病理特征，因此在醫(yī)學(xué)研究和精確醫(yī)學(xué)中具有巨大的前景。

2、 產(chǎn)品信息

3、 其他自備材料和試劑

4、 人結(jié)直腸癌類器官培養(yǎng)基使用說明

1、   收到類器官培養(yǎng)基后，將培養(yǎng)基置于4℃冰箱進行解凍。

2、   待培養(yǎng)基解凍后上下顛倒充分混勻，在生物安全柜或潔凈工作臺中根據(jù)日常需求量進行分裝，推薦分裝成10mL/管。

3、   分裝后的培養(yǎng)基請密封后儲存于-20℃，使用時取出分裝的培養(yǎng)基放置室溫平衡后即可使用。

5、 癌患者來源的結(jié)直腸癌類器官的建立和傳代培養(yǎng)

注意：涉及主要人體組織材料的研究必須遵循所有相關(guān)的機構(gòu)和政府法規(guī)。在收集主要人體組織材料之前，必須獲得所有受試者的知情同意。

a)     原代人結(jié)直腸癌類器官的建立

1、   用離心管將原發(fā)性結(jié)直腸癌類組織碎片收集在冰冷的原發(fā)組織儲存溶液中。將組織樣品保持在4℃，直到分離開始。

2、   評估獲得的組織碎片是否由上皮組成。如果存在脂肪或肌肉組織，請在解剖顯微鏡下使用刀或和鑷子盡可能多地去除這些非上皮成分。如果沒有脂肪或肌肉組織，請立即繼續(xù)下一步。

3、   用上皮類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基或DPBS沖洗組織兩次。

4、   使用刀或?qū)⒔M織切碎成1-3mm3的小碎片，置于細胞培養(yǎng)皿中。

5、   在37℃下用10mL腫瘤組織消化溶液在15mL離心管中消化組織片段，消化時間可變，從30分鐘到1.5小時不等。仔細監(jiān)測消化過程，可適當吹打取上清觀察消化程度。當大多數(shù)組織片段能夠通過1mL移液器吸頭時，消化過程即完成。

6、   將FBS加入組織消化混合物中，最終濃度為1%，并使用100μm細胞過濾器過濾。

7、   收集并在4°C下以250g離心過濾的細胞3分鐘。在可見的紅色沉淀的情況下，吸入上清液，并使用2mL紅細胞裂解液重懸沉淀，在室溫下裂解紅細胞1分鐘，并在4°C下以250g離心3分鐘。

8、   吸出上清液并將沉淀重懸于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，在4°C下以250g離心3分鐘，再次重復(fù)此步驟。

9、   吸出上清液并將沉淀重懸于基質(zhì)膠中。基質(zhì)膠應(yīng)保存在冰上以防止其凝固。盡快進行該過程。使用的基質(zhì)膠的量取決于顆粒的大小。大約10，000個細胞應(yīng)接種在25μL基質(zhì)膠中。

10、 不要過度稀釋基質(zhì)膠（基質(zhì)膠比例應(yīng)>70%（基質(zhì)膠體積/總體積）），因為這可能會抑制固體液滴的正確形成。將含有類器官的基質(zhì)膠鋪在24孔細胞培養(yǎng)板的底部，每個液滴圍繞孔中心約30μL。

注意：一旦類器官重懸于基質(zhì)膠中，盡快進行種板，因為基質(zhì)膠可能會在試管或移液器吸頭中凝固。不要讓基質(zhì)顆粒接觸管壁。

11、 將培養(yǎng)板放入37°C和5%CO?的培養(yǎng)箱中15-25分鐘，讓基質(zhì)凝膠固化。

12、 準備所需量的結(jié)直腸癌類器官培養(yǎng)基。

13、 一旦基質(zhì)膠滴凝固（15-25分鐘），打開板并小心地向每個孔中加入500μL結(jié)直腸癌類器官培養(yǎng)基。注意：不要將培養(yǎng)基直接添加到基質(zhì)膠液滴的頂部，因為這可能會破壞已凝固結(jié)構(gòu)。

14、 將培養(yǎng)板置于37℃和5%CO?的恒溫培養(yǎng)箱中。

15、 每隔3-4天更換一次培養(yǎng)基，小心地從孔中吸出培養(yǎng)基，并用新鮮的預(yù)熱的類器官培養(yǎng)基代替它。

16、 密切監(jiān)測類器官生長狀態(tài)，理想情況下，結(jié)直腸癌類器官應(yīng)在7-10天內(nèi)建成。

b)      人結(jié)直腸癌類器官的傳代培養(yǎng)

1、   用經(jīng)過潤洗液潤洗的槍頭吹打刮取類器官，并將類器官和培養(yǎng)基的懸液轉(zhuǎn)移至經(jīng)過潤洗液潤洗的1.5mLEP管中。

2、   用經(jīng)過潤洗液潤洗的槍頭用力重懸類器官懸浮液，使得類器官與基質(zhì)膠分離。

3、   250g離心力室溫離心3min。

4、   棄上清，使用類器官消化液或用機械破壞。對于使用類器官消化液的細胞解離，在類器官消化液中重懸類器官懸浮液，移液器反復(fù)上下吹打并置于37°C孵育，直至類器官解離。使用帶濾芯槍頭每2分鐘反復(fù)上下吹吸8次，以幫助類器官解離。密切監(jiān)視消化過程使在類器官解離液中的孵育時間最短。如發(fā)生機械故障，在1.5mL上皮類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基中重懸類器官懸液。小心地用移液管吸取類器官懸浮液，反復(fù)上下30次，這將有助于消化。

5、   消化完成后，用1mL上皮類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基進行一次沖洗，然后室溫下250g離心3分鐘。

6、   棄上清，用適量的基質(zhì)膠重懸類器官沉淀，重懸后置于冰上，重懸時間不超過30s以避免基質(zhì)膠過早凝固。

注意：基質(zhì)膠稀釋比例應(yīng)在70%以上以保證培養(yǎng)過程中基質(zhì)膠的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。

7、   將基質(zhì)膠和類器官的混合懸液點入24孔板底部正，避免懸液接觸孔板側(cè)壁，每孔20-30uL左右。注意：為防止基質(zhì)膠室溫凝固，此步驟應(yīng)盡快完成。

8、   將接種完成后的培養(yǎng)板至于37℃二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱中，孵育30min左右待基質(zhì)膠凝固。

9、   待基質(zhì)膠凝固后，加入已配制好的人結(jié)直腸癌類器官培養(yǎng)基，24孔板每孔加入500uL培養(yǎng)基。

10、 將24孔板置于37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直到類器官需要進一步的實驗。

V2.0版

更新時間：2025/6/21