靶點(diǎn)驗(yàn)證新趨勢(shì)：競(jìng)爭(zhēng)性ABPP解析檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

在新藥研發(fā)中，“靶點(diǎn)篩選”并不意味著“靶點(diǎn)確認(rèn)”。即使一個(gè)候選蛋白在差異表達(dá)或通路富集分析中被反復(fù)識(shí)別，也不代表它確實(shí)是藥物直接作用的靶點(diǎn)。真正關(guān)鍵的問(wèn)題是：

這個(gè)蛋白是否是藥物作用的“直接靶點(diǎn)”？是否存在共價(jià)結(jié)合？是否有選擇性抑制？是否存在潛在脫靶？

蛋白zhìzǔxué和分子生物學(xué)方法很難直接回答這些問(wèn)題。而競(jìng)爭(zhēng)性ABPP（Competitive Activity-Based Protein Profiling），作為ABPP技術(shù)的延伸與強(qiáng)化版本，正在成為靶點(diǎn)驗(yàn)證領(lǐng)域的新趨勢(shì)與新標(biāo)準(zhǔn)。百泰派克生物科技在ABPP平臺(tái)基礎(chǔ)上，shuàixiān建立競(jìng)爭(zhēng)性ABPP分析流程，已廣泛應(yīng)用于新型共價(jià)抑制劑、天然產(chǎn)物活性驗(yàn)證、以及先導(dǎo)化合物脫靶風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估項(xiàng)目中。

一、什么是競(jìng)爭(zhēng)性ABPP？

標(biāo)準(zhǔn)ABPP（Activity-Based Protein Profiling）通過(guò)共價(jià)探針（ABP）標(biāo)記活性蛋白，結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)識(shí)別并定量這些活躍酶類(lèi)，常用于篩選功能蛋白、識(shí)別藥物靶點(diǎn)。

競(jìng)爭(zhēng)性ABPP是一種通過(guò)引入藥物競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制、增強(qiáng)靶點(diǎn)驗(yàn)證能力的功能蛋白組學(xué)方法。其基本原理是：利用小分子藥物與活性位點(diǎn)探針對(duì)同一酶活性中心的“競(jìng)爭(zhēng)”結(jié)合，推斷藥物是否直接作用于該靶點(diǎn)酶。競(jìng)爭(zhēng)性ABPP以經(jīng)典ABPP技術(shù)為基礎(chǔ)，但在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)上引入了關(guān)鍵的“先藥物、后探針”的競(jìng)爭(zhēng)步驟，其基本流程如下：

1、樣本分組處理，包括藥物處理組與對(duì)照組；

2、分別加入ABP探針，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的活性位點(diǎn)標(biāo)記；

3、富集并酶解dànbáizhì樣本，保留與探針結(jié)合的活性酶；

4、通過(guò)質(zhì)譜分析對(duì)比兩組中各酶的探針結(jié)合程度；

5、根據(jù)探針信號(hào)變化判斷藥物是否與該酶直接競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。

若某一酶在藥物組中信號(hào)顯著降低，則表明藥物對(duì)該酶的活性中心具有較強(qiáng)親和力，提示為候選直接靶點(diǎn)。反之，信號(hào)不變則說(shuō)明該酶未被藥物作用或?yàn)榉前邢蚪Y(jié)合。

二、競(jìng)爭(zhēng)性ABPP的dútè優(yōu)勢(shì)

與蛋白組學(xué)、化學(xué)蛋白zhìzǔxué方法相比，競(jìng)爭(zhēng)性ABPP展現(xiàn)出多維度的優(yōu)勢(shì)：

1、功能導(dǎo)向

競(jìng)爭(zhēng)性ABPP關(guān)注的是蛋白的活性狀態(tài)而非總量或表達(dá)水平，能夠捕捉到在疾病或藥物刺激下真實(shí)參與生理過(guò)程的“功能性靶點(diǎn)”。

2、結(jié)合事件直接可視化

通過(guò)對(duì)比藥物干預(yù)前后的探針結(jié)合差異，研究者可直接判斷藥物是否作用于特定酶的催化中心，從而避開(kāi)傳統(tǒng)驗(yàn)證路徑中繁瑣的“間接信號(hào)解釋”。

3、選擇性與脫靶評(píng)估同步完成

競(jìng)爭(zhēng)性ABPP不僅可以確認(rèn)藥物是否作用于目標(biāo)酶，還可以在同一實(shí)驗(yàn)體系中評(píng)估其對(duì)非目標(biāo)酶類(lèi)的作用影響，對(duì)優(yōu)化藥物結(jié)構(gòu)、降低毒副風(fēng)險(xiǎn)具有重要參考價(jià)值。

4、技術(shù)適配性強(qiáng)

該技術(shù)兼容細(xì)胞裂解液、組織勻漿甚至體內(nèi)標(biāo)記體系，適合在多個(gè)模型系統(tǒng)中開(kāi)展驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，具備良好的轉(zhuǎn)化能力。

三、為什么競(jìng)爭(zhēng)性ABPP成為“靶點(diǎn)驗(yàn)證新標(biāo)準(zhǔn)”？

1、明確識(shí)別“直接結(jié)合靶點(diǎn)”

相比差異蛋白篩選方法，競(jìng)爭(zhēng)性ABPP可直接判斷藥物是否與特定酶發(fā)生物理結(jié)合，是目前zuì可靠的“共價(jià)靶點(diǎn)確認(rèn)手段”。

2、分析藥物選擇性

通過(guò)“競(jìng)爭(zhēng)阻斷程度”評(píng)估藥物對(duì)不同酶的親和力與選擇性，利于優(yōu)化結(jié)構(gòu)、控制副作用。

3、檢測(cè)脫靶效應(yīng)

競(jìng)爭(zhēng)性ABPP可發(fā)現(xiàn)藥物意外作用的非靶向酶，提示潛在毒性或干擾機(jī)制。

4、適配共價(jià)藥物開(kāi)發(fā)路徑

在Ibrutinib、Neratinib、Afatinib等多個(gè)共價(jià)藥物開(kāi)發(fā)案例中，競(jìng)爭(zhēng)性ABPP已被廣泛用于申報(bào)前靶點(diǎn)驗(yàn)證數(shù)據(jù)準(zhǔn)備。

百泰派克競(jìng)爭(zhēng)性ABPP平臺(tái)的zhuānyè支持

作為功能蛋白組學(xué)方向的核心平臺(tái)，百泰派克在競(jìng)爭(zhēng)性ABPP技術(shù)領(lǐng)域建立了從探針篩選、樣本處理、質(zhì)譜檢測(cè)到靶點(diǎn)數(shù)據(jù)解讀的全流程標(biāo)準(zhǔn)服務(wù)體系：

1、支持多種酶類(lèi)探針，涵蓋sīānsuān酶、半胱天冬酶、金屬蛋白酶等；

2、樣本適配范圍廣泛，支持細(xì)胞系、動(dòng)物組織、人類(lèi)生物樣本等；

3、定量精度可控，基于高分辨質(zhì)譜平臺(tái)進(jìn)行肽段識(shí)別與定量；

4、提供結(jié)合抑制分析報(bào)告，包含阻斷率計(jì)算、靶點(diǎn)優(yōu)先級(jí)排序、GO/KEGG注釋與圖譜化輸出；

5、提供多輪驗(yàn)證設(shè)計(jì)支持，適配結(jié)構(gòu)改進(jìn)、劑量梯度、時(shí)間動(dòng)態(tài)分析等實(shí)驗(yàn)需求。

傳統(tǒng)靶點(diǎn)研究往往依賴多輪表達(dá)驗(yàn)證與功能推測(cè)，難以快速明確藥物與酶類(lèi)靶點(diǎn)的直接關(guān)系。而競(jìng)爭(zhēng)性ABPP提供了一種更清晰、更邏輯嚴(yán)謹(jǐn)?shù)尿?yàn)證路徑：用“阻斷”證明“結(jié)合”，用“差異”確認(rèn)“直接作用”。在“表達(dá)→功能→作用機(jī)制”這一科研認(rèn)知鏈條中，競(jìng)爭(zhēng)性ABPP正逐步成為承上啟下的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上*的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白zhìzǔxué

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量蛋白zhìzǔxué、bǎxiàngdàn白zhìzǔxué、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種蛋白zhìzǔxué分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白zhìzǔxué服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)*，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專(zhuān)有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋蛋白zhìzǔxué、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

靶點(diǎn)驗(yàn)證新趨勢(shì)：競(jìng)爭(zhēng)性ABPP解析檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹