利用MALDI-TOF質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行蛋白質(zhì)N-端序列分析檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

dànbáizhì的N-端序列分析是解析dànbáizhì功能、翻譯后修飾及生物合成機(jī)制的重要手段。傳統(tǒng)的Edman降解法是經(jīng)典的N-duāncèxù技術(shù)，但其在復(fù)雜樣本中的應(yīng)用受限。近年來(lái)，基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）以其高靈敏度、快速檢測(cè)能力和寬動(dòng)態(tài)范圍，在dànbáizhìN-端序列分析方面展現(xiàn)出重要應(yīng)用價(jià)值。本文系統(tǒng)闡述其技術(shù)原理、實(shí)驗(yàn)流程及關(guān)鍵挑戰(zhàn)。

一、技術(shù)原理與核心優(yōu)勢(shì)

1、MALDI-TOF的技術(shù)原理

在dànbáizhìN-端序列分析中，MALDI-TOF-MS可用于檢測(cè)N-端特異性酶解或化學(xué)修飾后的肽段，從而推測(cè)蛋白的N-端序列信息?；贛ALDI-TOF-MS的N-duāncèxù通常依賴(lài)于兩種主要策略：

（1）N-端特異性降解法：通過(guò)化學(xué)或酶解方法逐步降解蛋白N-端，每次去除一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基，并利用MALDI-TOF-MS測(cè)定殘余肽段的分子量變化，從而推導(dǎo)序列信息。

（2）N-端標(biāo)記與碎裂分析法：通過(guò)特異性化學(xué)修飾N-端，并結(jié)合片段離子分析，提高對(duì)N-端序列的解析能力。

2、核心優(yōu)勢(shì)

（1）抗鹽干擾能力：MALDI對(duì)樣品中鹽類(lèi)及去污劑的耐受性?xún)?yōu)于電噴霧電離（ESI），適合直接分析粗提樣本。

（2）高通量特性：?jiǎn)未吸c(diǎn)樣可快速獲取多個(gè)樣本的譜圖，適用于批量篩選。

（3）兼容化學(xué)衍生化：N-端氨基的特異性標(biāo)記（如丹磺酰氯）可增強(qiáng)電離效率并簡(jiǎn)化譜圖解析。

二、實(shí)驗(yàn)流程

MALDI-TOF質(zhì)譜技術(shù)用于dànbáizhìN-端序列分析時(shí)，需通過(guò)系統(tǒng)化的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)肽段的特異性捕獲與高效檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)流程通常涵蓋樣品前處理、質(zhì)譜檢測(cè)與數(shù)據(jù)分析三大階段，各環(huán)節(jié)緊密銜接，共同確保結(jié)果的可靠性。

1、樣品前處理階段

首先需對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行純化，以降低背景干擾。通過(guò)SDS-PAGE電泳或液相色譜分離獲取高純度蛋白后，采用限制性酶解策略釋放含N-端的特征肽段。例如，使用Lys-C蛋白酶在賴(lài)氨酸殘基C端切割，生成較長(zhǎng)的N-端肽段（通常為10-30個(gè)氨基酸），避免因肽段過(guò)短導(dǎo)致的質(zhì)譜信號(hào)弱化。對(duì)于N-端封閉（如乙?；┑臉颖?，可先通過(guò)化學(xué)去封閉處理（如鹽酸胍變性聯(lián)合焦碳酸二乙酯修飾）恢復(fù)游離氨基的反應(yīng)活性。隨后，利用N-端特異性化學(xué)標(biāo)記技術(shù)（如丹磺酰氯或同位素編碼試劑）對(duì)氨基進(jìn)行衍生化，既能增強(qiáng)電離效率，也可通過(guò)親和層析（如鏈霉親和素磁珠）實(shí)現(xiàn)N-端肽段的靶向富集。

2、質(zhì)譜檢測(cè)階段

dànbáizhìN-端序列分析過(guò)程中，質(zhì)譜檢測(cè)階段的核心在于基質(zhì)選擇與儀器參數(shù)優(yōu)化。針對(duì)N-端肽段的質(zhì)量范圍，優(yōu)先選用α-氰基-4-羥基肉桂酸（CHCA）作為基質(zhì)，其在小分子量區(qū)域（1-5 kDa）具有優(yōu)異的結(jié)晶均一性與離子化效率。點(diǎn)樣時(shí)采用薄層法制備靶板，通過(guò)乙醇-丙酮混合溶劑促進(jìn)基質(zhì)與肽段的共結(jié)晶，減少鹽分干擾并提升信號(hào)重現(xiàn)性。質(zhì)譜參數(shù)設(shè)置需兼顧靈敏度與分辨率：激光能量逐步調(diào)整至產(chǎn)生穩(wěn)定信號(hào)的zuì低閾值，避免碎片離子過(guò)多；延遲提取時(shí)間與反射模式的組合可改善低質(zhì)量端的分辨率，確保準(zhǔn)確識(shí)別相鄰質(zhì)量峰。

3、數(shù)據(jù)分析階段

該階段需結(jié)合肽質(zhì)量指紋圖譜（PMF）與碎片離子信息進(jìn)行綜合解析。將實(shí)驗(yàn)獲得的肽段質(zhì)量數(shù)輸入數(shù)據(jù)庫(kù)（如Mascot或FlexAnalysis），匹配理論酶解產(chǎn)生的N-端肽段，并通過(guò)源后衰變（PSD）或MALDI-TOF/TOF串聯(lián)質(zhì)譜獲取y/b離子系列，驗(yàn)證序列準(zhǔn)確性。對(duì)于存在翻譯后修飾（如乙?；蚣柞；┑臉颖?，需在搜索參數(shù)中納入相應(yīng)質(zhì)量偏移，并通過(guò)碎片離子定位修飾位點(diǎn)。若遇到數(shù)據(jù)庫(kù)未收錄的新序列，可借助從頭測(cè)序算法（如DeNovoGUI）解析譜圖中的連續(xù)離子簇，逐步推導(dǎo)N-端氨基酸排列順序。

三、技術(shù)難點(diǎn)與挑戰(zhàn)

1、N-端阻斷問(wèn)題

dànbáizhì的N-端常因翻譯后修飾（如乙?；⒓谆┒鴮?dǎo)致Edman降解或化學(xué)標(biāo)記難以進(jìn)行，影響序列解析。

2、信號(hào)強(qiáng)度與分辨率

MALDI-TOF-MS對(duì)復(fù)雜肽段的檢測(cè)可能受到基質(zhì)效應(yīng)、離子抑制等因素的影響，導(dǎo)致信號(hào)強(qiáng)度不足或分辨率下降。

3、碎裂模式優(yōu)化

現(xiàn)有MALDI-TOF-MS碎裂模式（如PSD、LIFT）在N-duāncèxù中的適用性仍有待提升，以提高片段離子覆蓋率。

4、數(shù)據(jù)庫(kù)匹配與生物信息學(xué)分析

MALDI-TOF-MS數(shù)據(jù)解析依賴(lài)數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，需優(yōu)化算法以提高N-端序列匹配準(zhǔn)確性。

MALDI-TOF質(zhì)譜技術(shù)為dànbáizhìN-端序列分析提供了快速、高通量的解決方案，但其成功應(yīng)用依賴(lài)于樣品前處理的jīngquè設(shè)計(jì)與數(shù)據(jù)分析策略的創(chuàng)新。通過(guò)化學(xué)標(biāo)記富集、酶解方案優(yōu)化及高分辨質(zhì)譜技術(shù)的結(jié)合，研究者能夠克服N-端封閉、低豐度檢測(cè)等傳統(tǒng)瓶頸。未來(lái)，隨著新型基質(zhì)材料、人工智能驅(qū)動(dòng)的譜圖解析工具及單細(xì)胞水平分析技術(shù)的發(fā)展，MALDI-TOF有望在dànbáizhì組學(xué)與jīngzhǔn醫(yī)學(xué)中發(fā)揮更重要的作用，為揭示N-端“功能密碼”提供關(guān)鍵技術(shù)支撐。百泰派克生物科技獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，涵蓋jiānduān的儀器和技術(shù)，為您提供高質(zhì)量的dànbáizhìN-端序列分析服務(wù)。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專(zhuān)有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶(hù)提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶(hù)提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿(mǎn)足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶(hù)的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

利用MALDI-TOF質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行蛋白質(zhì)N-端序列分析檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹