親和純化 - 質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

親和純化 - 質(zhì)譜聯(lián)用（Affinity Purification-Mass Spectrometry, AP-MS）是一種結(jié)合了特異性dànbáizhì分離技術(shù)與高靈敏度分子檢測(cè)技術(shù)的綜合方法，廣泛應(yīng)用于dànbáizhì組學(xué)研究中。這一技術(shù)的基本思想是通過(guò)親和純化從復(fù)雜生物樣品中選擇性地分離目標(biāo)dànbáizhì及其相關(guān)分子，然后利用質(zhì)譜分析對(duì)分離的分子進(jìn)行鑒定和定量。親和純化依賴于目標(biāo)蛋白與其結(jié)合分子之間的高特異性相互作用，例如抗體與抗原、配體與受體、或shēngwùsù與鏈霉親和素，這種高效的分離手段確保了目標(biāo)蛋白及其相互作用分子的富集；而質(zhì)譜分析通過(guò)測(cè)量分子的質(zhì)量和豐度信息，為研究者提供了目標(biāo)蛋白復(fù)合物的組成及其相互作用網(wǎng)絡(luò)的全景視圖。親和純化 - 質(zhì)譜聯(lián)用不僅是研究dànbáizhì相互作用的有力工具，更是一種解析生物分子復(fù)雜動(dòng)態(tài)網(wǎng)絡(luò)的通用技術(shù)。在基礎(chǔ)生命科學(xué)研究中，該技術(shù)被用來(lái)探究dànbáizhì復(fù)合物的功能組成、信號(hào)通路的動(dòng)態(tài)變化，以及翻譯后修飾的影響；在應(yīng)用研究中，它為新型藥物靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)、疾病相關(guān)分子的鑒定及功能驗(yàn)證提供了有力支持。與傳統(tǒng)dànbáizhì研究方法（如共聚焦顯微鏡或dànbáizhì免疫印跡）相比，親和純化 - 質(zhì)譜聯(lián)用的優(yōu)勢(shì)在于其高靈敏度、高通量和廣覆蓋性，能夠捕捉細(xì)胞環(huán)境中的低豐度蛋白及其伴隨分子，進(jìn)而揭示分子調(diào)控的潛在機(jī)制。近年來(lái)，該技術(shù)的進(jìn)步使得我們能夠以更高的jīngquè度解析動(dòng)態(tài)的dànbáizhì相互作用網(wǎng)絡(luò)，從而為揭示細(xì)胞活動(dòng)的機(jī)制和疾病的病理過(guò)程提供了qiánsuǒwèiyǒu的洞察。

一、親和純化 - 質(zhì)譜聯(lián)用的技術(shù)原理與關(guān)鍵步驟

親和純化 - 質(zhì)譜聯(lián)用的成功依賴于兩個(gè)關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)：親和純化和質(zhì)譜分析。

1、親和純化

親和純化是親和純化 - 質(zhì)譜聯(lián)用的dìyī步，其核心在于通過(guò)目標(biāo)蛋白與特定結(jié)合物之間的高特異性相互作用，從復(fù)雜的生物樣品中富集目標(biāo)蛋白及其相關(guān)分子。該步驟通常包括以下幾種方法：

（1）抗體依賴的親和純化：使用特異性抗體識(shí)別目標(biāo)蛋白或蛋白標(biāo)簽（如FLAG、HA、His標(biāo)簽）進(jìn)行親和純化。

（2）配體-受體親和純化：使用天然配體或合成分子捕獲目標(biāo)蛋白，例如利用DNA、RNA或小分子化合物結(jié)合特定dànbáizhì。

（3）標(biāo)記輔助親和純化：為目標(biāo)蛋白引入shēngwùsù標(biāo)簽，利用鏈霉親和素的高親和性實(shí)現(xiàn)分離。

在親和純化過(guò)程中，為減少背景噪聲，需優(yōu)化洗滌條件，去除非特異性結(jié)合的分子，并確保目標(biāo)蛋白復(fù)合物的完整性。

2、質(zhì)譜分析

純化后的dànbáizhì復(fù)合物通過(guò)酶解（通常為yídànbáiméi）轉(zhuǎn)化為肽段，然后通過(guò)質(zhì)譜分析實(shí)現(xiàn)高靈敏度檢測(cè)。常用的質(zhì)譜方法包括：

（1）液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS/MS）：通過(guò)液相色譜對(duì)肽段進(jìn)行分離，再結(jié)合串聯(lián)質(zhì)譜（MS/MS）對(duì)其進(jìn)行鑒定。

（2）定量質(zhì)譜：包括biāojìdìng量（如SILAC、TMT/iTRAQ）和無(wú)標(biāo)定量（如基于光譜計(jì)數(shù)或峰面積的定量），實(shí)現(xiàn)對(duì)dànbáizhì豐度的比較分析。

質(zhì)譜結(jié)果通常經(jīng)過(guò)zhuānyè的生物信息學(xué)工具進(jìn)行解析，如數(shù)據(jù)庫(kù)搜索（Mascot、Sequest）和統(tǒng)計(jì)分析，從而獲得dànbáizhì組信息。

二、應(yīng)用與研究?jī)r(jià)值

親和純化 - 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在多個(gè)研究領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用，以下是其主要方向：

1、dànbáizhì相互作用網(wǎng)絡(luò)解析

親和純化 - 質(zhì)譜聯(lián)用能夠揭示目標(biāo)蛋白與其他dànbáizhì之間的物理或功能相互作用，從而構(gòu)建相互作用網(wǎng)絡(luò)。這對(duì)理解dànbáizhì在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝調(diào)控和病理過(guò)程中的作用尤為重要。例如，通過(guò)這項(xiàng)技術(shù)，研究者發(fā)現(xiàn)了許多疾病相關(guān)的dànbáizhì相互作用網(wǎng)絡(luò)，為靶向治療提供了新思路。

2、dànbáizhì復(fù)合物組成分析

細(xì)胞中許多生物學(xué)功能是由dànbáizhì復(fù)合物協(xié)同完成的，該技術(shù)不僅能夠富集目標(biāo)蛋白，還能鑒定其復(fù)合物的具體組成，為理解分子機(jī)制提供了重要線索。

3、翻譯后修飾研究

結(jié)合特異性修飾抗體（如磷酸化抗體），親和純化 - 質(zhì)譜聯(lián)用可用于研究dànbáizhì翻譯后修飾的動(dòng)態(tài)變化及其對(duì)dànbáizhì功能的調(diào)控。

4、藥物靶點(diǎn)篩選與驗(yàn)證

在藥物研發(fā)中，親和純化 - 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)被用來(lái)確認(rèn)藥物的靶點(diǎn)及其作用機(jī)制，同時(shí)篩選藥物干預(yù)后dànbáizhì相互作用的變化。

三、注意事項(xiàng)與挑戰(zhàn)

親和純化 - 質(zhì)譜聯(lián)用的結(jié)果準(zhǔn)確性依賴于嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作。以下是常見的挑戰(zhàn)與注意事項(xiàng)：

1、非特異性結(jié)合

在親和純化過(guò)程中，非目標(biāo)dànbáizhì可能通過(guò)非特異性結(jié)合進(jìn)入復(fù)合物中，需要優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件以減少背景噪聲。

2、樣品損失與降解

樣品制備時(shí)需加入蛋白酶抑制劑，避免dànbáizhì降解。同時(shí)，應(yīng)使用溫和的裂解條件保護(hù)dànbáizhì復(fù)合物的完整性。

3、質(zhì)譜靈敏度與覆蓋率

對(duì)低豐度蛋白的檢測(cè)可能受到限制，需結(jié)合高靈敏度質(zhì)譜儀或進(jìn)一步優(yōu)化樣品分離策略。

百泰派克生物科技利用優(yōu)良平臺(tái)和技術(shù)為客戶提供從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)到數(shù)據(jù)分析的全流程服務(wù)，我們的技術(shù)團(tuán)隊(duì)嚴(yán)控實(shí)驗(yàn)過(guò)程，確保高質(zhì)量數(shù)據(jù)輸出，助力您的科研探索，為生命科學(xué)研究和技術(shù)開發(fā)創(chuàng)造更多可能性。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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