超敏ECL發(fā)光液 

1. 超敏ECL發(fā)光液 產(chǎn)品描述：

SuperECL Plus超敏發(fā)光液用于檢測(cè)直接或間接標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶HRP的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。由于采用了*的發(fā)光底物系統(tǒng)，SuperECL Plus超敏發(fā)光液是目前靈敏的商業(yè)化熒光ECL檢測(cè)試劑：

（1）具有*靈敏度和高信噪比，可檢測(cè)10～100 fg抗原；

（2）可在日光燈下進(jìn)行發(fā)光操作；

（3）發(fā)光迅速，熒光可使X光膠片感光達(dá)12小時(shí)以上，特別適用于痕量蛋白或核酸檢測(cè)；

（4） 可使用更高的抗體稀釋倍數(shù)(1:2000～1:10000)，極其節(jié)省抗體。

2. 用途：用于HRP標(biāo)記抗體的Western Blot和HRP標(biāo)記探針的核酸雜交。

3. 使用方法:

（1）執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉(zhuǎn)膜和Western Blot步驟。注意用HRP標(biāo)記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法。

（2）Western Blot后一次洗膜的同時(shí)新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的溶液A和B，放入干凈容器中混合。建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時(shí)后仍可使用但靈敏度略有降低。

（3）用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜*干燥。將膜*浸入發(fā)光工作液（0.125mL發(fā)光工作液/cm2膜）中，與發(fā)光工作液充分接觸。室溫孵育3分鐘，準(zhǔn)備立即壓片曝光。孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)不會(huì)增加靈敏度，有時(shí)還會(huì)導(dǎo)致曝光條帶異常。發(fā)光過(guò)程的本質(zhì)是酶促反應(yīng)，使用過(guò)少的發(fā)光工作液不利反應(yīng)進(jìn)行，也會(huì)導(dǎo)致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。

（4）用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。但勿洗去發(fā)光液。

（5）打開(kāi)X光膠片暗盒，在暗盒內(nèi)表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將Western Blot膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來(lái)*包裹Western Blot膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋Western Blot膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，蛋白帶面向上。

（6）暗房?jī)?nèi)壓X光膠片，分別曝光不同的時(shí)間如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗。           

4. 儲(chǔ)存：4℃密封避光保存一年以上。短期可放置室溫。

5. 安全性：無(wú)特殊毒性，按普通化學(xué)品處理。

6. 注意事項(xiàng)：

（1）步驟1～5可在日光燈下操作；但發(fā)光液曝露于強(qiáng)光下時(shí)間過(guò)久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。

（2）長(zhǎng)時(shí)間曝光或蛋白過(guò)量，將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。

（3）發(fā)光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強(qiáng)條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見(jiàn)，低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚至肉眼不可見(jiàn)但可使X光膠片曝光。不能簡(jiǎn)單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時(shí)間。肉眼不可見(jiàn)的熒光實(shí)際上可持續(xù)數(shù)小時(shí)并使X光膠片感光，因而弱帶可曝光1-10小時(shí)。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL發(fā)光和曝光。

（4）由于超敏發(fā)光液極其靈敏，強(qiáng)烈推薦大多數(shù)進(jìn)口抗體起始濃度為一抗1:1000～1:4000，二抗1:2000～1:5000?？贵w濃度過(guò)高將造成高背景或沒(méi)有條帶，導(dǎo)致失敗。對(duì)于大量蛋白需要將SuperECL 稀釋20-25倍使用。

（5）某些保鮮膜包裹印跡膜時(shí)可能會(huì)淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜。

（6）使用肉眼可見(jiàn)的預(yù)染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。

（7）NaN3能抑制HRP活性，回收第二抗體應(yīng)避免使用NaN3，如必需使用勿超過(guò)0.01%。