專(zhuān)業(yè)新篩采血濾紙（即用型）

【前言簡(jiǎn)介】

胰蛋白酶最初是由外分泌胰腺的腺泡細(xì)胞合成并分泌的，是胰蛋白酶原的前體或原酶（分子量-24,000）。已經(jīng)認(rèn)識(shí)到兩種不同的胰蛋白酶原同工酶。兩種形式都通過(guò)十二指腸腸激酶的作用轉(zhuǎn)化為具有酶活性的胰蛋白酶。在存在CA ++離子的情況下，這種腸激酶可以從胰蛋白酶原中去除六肽Val-（Asp）4 -Lys，從而釋放出胰蛋白酶的活性形式。

血液中出現(xiàn)三種特定的胰蛋白酶“酶活性”抑制劑：α1-抗胰蛋白酶，α2-宏球蛋白和α-胰蛋白酶間抑制劑。由于內(nèi)源性因子與所使用的特定胰蛋白酶抗體之間存在競(jìng)爭(zhēng)性和可變性的血清胰蛋白酶抑制作用，并且由于某些胰蛋白酶原未進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)，因此新生兒胰蛋白酶ELISA與先前報(bào)道的測(cè)定方法一致，即將其測(cè)定的物種描述為“總免疫反應(yīng)性胰蛋白酶”類(lèi)似活動(dòng)”或IRT。

作為樣品，該測(cè)定利用一個(gè)3mm的打孔濾紙盤(pán)。該測(cè)定包括過(guò)夜孵育和1.25小時(shí)孵育。使用圓盤(pán)打孔，移液和洗板設(shè)備可以大大自動(dòng)化該測(cè)定。

每個(gè)實(shí)驗(yàn)室必須確定正常范圍，并與所使用的免疫試劑一致。由于不同測(cè)定系統(tǒng)之間的校準(zhǔn)值不同，因此目前很難達(dá)到通用的正常范圍。

【檢測(cè)原理】

此試劑盒采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）技術(shù)對(duì)血斑樣品中的人胰蛋白酶進(jìn)行定量。在ELISA分析中，針對(duì)同一抗原的不同部分產(chǎn)生了兩種互補(bǔ)的抗體構(gòu)型。在ELISA中，一種抗體系統(tǒng)與微孔板結(jié)合，另一種抗體用酶標(biāo)記。當(dāng)存在抗原時(shí)，它同時(shí)以“橋”或“三明治”方式結(jié)合兩種抗體。整個(gè)復(fù)合體仍然與孔相連。洗掉“未結(jié)合”的酶后，添加特定的底物并將其轉(zhuǎn)化為有色的終產(chǎn)物，并用終止溶液迅速終止反應(yīng)。

讀取每個(gè)孔在450 nm處的吸光度，并將結(jié)果繪制為以ng / mL為單位的IRT濃度與方格紙上的吸光度的關(guān)系。

在此過(guò)程中，從在Schleicher和Schuell的＃903濾紙上收集的血跡打孔一張圓盤(pán)。將該盤(pán)與洗脫緩沖液一起放入抗體孔中。過(guò)夜孵育后，吸出洗脫緩沖液和血點(diǎn)，洗滌孔，并添加酶標(biāo)記的抗體。第二次孵育后，將孔洗滌，并將底物添加到孔中。用終止溶液迅速終止酶反應(yīng)，并讀取吸光度。然后構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，從中可以計(jì)算出未知濃度的胰蛋白酶。

兔抗IRT抗體

最重要的是，IRT ELISA利用IRT抗體，它具有針對(duì)IRT的“分子形式”的特異性。（23-27）

自從抗IRT的多克隆抗體的最初發(fā)展以來(lái)，我們已就該抗體與“病理”形式的IRT相對(duì)于正常循環(huán)形式增強(qiáng)的反應(yīng)性報(bào)道了抗體。這種“病理學(xué)特異性”與所用標(biāo)準(zhǔn)品絕對(duì)值的定量差異無(wú)關(guān)，并且是抗體的功能。對(duì)該抗體進(jìn)行廣泛分析的結(jié)果表明，就其分子種類(lèi)或相互作用而言，“病理IRT”比純化的完整胰蛋白酶對(duì)我們的抗體表現(xiàn)出更大的“效力”。

注，此EIA-1278試劑盒使用的濾紙為“專(zhuān)業(yè)新篩采血濾紙（即用型）”，請(qǐng)咨詢(xún)我們獲取專(zhuān)業(yè)服務(wù)

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