歡迎咨詢 進(jìn)口分裝Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒*
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 北京嘉美諾斯生物科技有限公司
- 品牌
- 型號 歡迎咨詢
- 產(chǎn)地 http://www.jiamay.com/vshow_1_1526.html
- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時(shí)間 2017/11/26 13:09:40
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關(guān)鍵詞：嘉美生物，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抗體，重組人和動(dòng)物蛋白，磷酸化抗體，各種動(dòng)物ELISA試劑盒，miRNA檢測，實(shí)驗(yàn)服務(wù)，Annexin V，細(xì)胞凋亡，雙染試劑盒
*信息：
| 目錄號 | 品名 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 優(yōu)惠價(jià) |
| LHK601-020 | Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒 | 20 Tests | 500 | 350 |
| LHK601-050 | Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒 | 50 Tests | 1000 | 700 |
| LHK601-100 | Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒 | 100Tests | 1600 | 1120 |
*日期：2011年6月20日——2011年8月31日
一、概述
在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，細(xì)胞發(fā)生凋亡zui早期，膜磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)，這一變化早于細(xì)胞皺縮、染色質(zhì)濃縮、DNA片斷化和細(xì)胞膜的通透性增加等凋亡現(xiàn)象。Annexin V是一種磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被作為檢測細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，但凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞由于細(xì)胞膜通透性的增加，PI能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞區(qū)分開來。
圖1 Annexin V檢測凋亡的原理示意圖
a．正常細(xì)胞群 b. 誘導(dǎo)凋亡細(xì)胞群
圖2 Annexin V-FITC&PI試劑盒檢測凋亡的流式示意圖
二、試劑盒組份
| | 20 Tests | 50 Tests | 100Tests |
| AnnexinV-FITC | 100μl | 250μl | 500μl |
| 10×Bining Buffer | 2ml | 4ml | 6ml |
| Propidium Iodide | 100μl | 250μl | 500μl |
三、步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的胰酶消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的胰酶消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×binding buffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的胰酶消化收集后（注：胰酶消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰絲氨酸與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
貼壁細(xì)胞需用0.25%的胰酶消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的胰酶消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×binding buffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的胰酶消化收集后（注：胰酶消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰絲氨酸與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
四、保存
4℃保存，兩個(gè)月內(nèi)可保持穩(wěn)定；避免反復(fù)凍融。
五、注意事項(xiàng)
（1）本試劑只適用于實(shí)驗(yàn)，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時(shí)需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí)，盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
（5）在細(xì)胞洗滌的zui后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
（7）PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，zui短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
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