免疫組化試劑盒使用說明書        

（通用型）

工作原理

SABC（Strept Avidin-Biotin Complex）是專為免疫組化等免疫反應(yīng)而設(shè)計的，用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親和素是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì)，分子量47000。同親和素一樣，對生物素分子有*的親和力。鏈霉親和素等電點接近中性,IP=6.0-6.5，對組織和細(xì)胞的非特異吸附很低，因而基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景往往很低。根據(jù)研究，SABC 大約可形成一百個左右的過氧化物酶和五十個左右的鏈霉親和素所構(gòu)成的復(fù)合物。先用生物素標(biāo)記的二抗特異性的結(jié)合一抗，然后通過二抗聚合大量的鏈酶親和素—過氧化物酶復(fù)合物，形成鏈霉素親霉素酶復(fù)合體（SABC）。這樣也保證了SABC 具有很高的敏感性。SABC 兼具高敏感性，低背景和操作簡便的優(yōu)點。

辣根過氧化物酶（HRP）由于在辣根中的含量很高，故命名。它的分子量在40000左右，在過氧化氫存在時能催化苯酚、苯胺等聚合，它不會遮蓋抗原的結(jié)合部位，具有較高活性及特異性，生成的產(chǎn)物不易擴(kuò)散，可作用于多種底物，產(chǎn)生不同顏色且HRP穿透力強(qiáng)，易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。DAB在 H₂O₂存在的情況下，可以作為HRP的電子供體，產(chǎn)生褐色的不溶顆粒，可作為顯色的試劑。

試劑盒組成（*切片數(shù)50～100pcs）

操作步驟

1.      切片防脫片劑處理:可選擇APES 或Poly-Lysine。撈片后置烤箱58-60 ℃30-60 分以，使切片緊密粘附。

2.      防脫片劑處理后的切片在二甲苯中脫蠟，然后逐級降濃度酒精入水，每次3-5 分鐘；

*I（變?yōu)椴煌该鳎?span lang="EN-US">                 1－2分鐘
*II                              1－2分鐘
95% 酒精                                1－2分鐘
80% 酒精                                1－2分鐘   
自來水洗                                 片刻   

3.      0.01mol/L pH7.4 PBS洗滌3次，每次5 分鐘 ；

4.      3% H ₂ O ₂ 室溫孵育 5-10 分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS洗滌2-3次，每次5 分鐘；

5.      0.01mol/L pH6.0檸檬酸緩沖液復(fù)性20分鐘，冷卻至室溫。0.01 mol/L  pH7.4的PBS洗滌3次，每次5 分鐘 ；

6.      加封閉液（5%BSA）50ul/片，于濕盒中室溫感作30分鐘，然后甩去多余的封閉液，不洗滌；

7.      滴加一抗到切片上37℃孵育1小時左右或者4℃過夜， 然后0.01 mol/LpH7.4的PBS洗滌3次，每次5 分鐘 ；

8.      滴加二抗，覆蓋切片，置濕盒中37℃感作30分鐘左右（以錫紙避光即可），取出后洗滌（方法同4）。

9.      DAB顯色；

10.  蘇木素輕度復(fù)染。脫水，透明，封片。顯微鏡觀察。

保存方法   2-8℃保存，注意避免冷凍。

有 效 期   一年                                 

生產(chǎn)日期   見封口