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液相色譜的系統(tǒng)構(gòu)成和操作注意事項

時間:2019/11/23閱讀:829
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液相色譜法(HPLC)具有高壓、、高速、高靈敏度、高選擇性等特點,廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、環(huán)保、石化、食品、化工等行業(yè),是現(xiàn)在分離分析的重要方法。

HPLC是集成化很高的儀器。有五大系統(tǒng)構(gòu)成:動力系統(tǒng),進(jìn)樣系統(tǒng),分離系統(tǒng),檢測系統(tǒng),數(shù)據(jù)分析和記錄系統(tǒng)構(gòu)成。
其中:
動力系統(tǒng):泵
進(jìn)樣系統(tǒng):六通閥和進(jìn)樣針,或者自動進(jìn)樣器
分離系統(tǒng):色譜柱
檢測系統(tǒng):檢測器,一般有紫外檢測器,熒光檢測器,示差折光檢測器,MS檢測器等等。
記錄系統(tǒng):電腦工作站等
連接這些設(shè)備的都是由一根根不銹鋼管或者PEEK管構(gòu)成。

HPLC日常操作注意事項:

選擇流動相時應(yīng)注意的幾個問題:

1、盡量使用高純度試劑作流動相,防止微量雜質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。

2、避免流動相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。

3、試樣在流動相中應(yīng)有適宜的溶解度,防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。

4、流動相同時還應(yīng)滿足檢測器的要求。當(dāng)使用紫外檢測器時,流動相不應(yīng)有較強的紫外吸收,一般檢測波長應(yīng)大于流動相的截止波長。


泵的維護(hù)保養(yǎng):

1、防止任何固體微粒進(jìn)入泵體,否則會磨損柱塞、密封環(huán)缸體和單向閥,因此應(yīng)預(yù)先對流動相進(jìn)行過濾,可采用Millipore濾膜(0.22μm或 0.45μm )等過濾。泵的入口都應(yīng)該連接砂濾棒(或片), 輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常更換。

2、流動相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì), 含有緩沖液的流動相不應(yīng)保留在泵內(nèi), 尤其是停泵過夜或更長時間。分析工作結(jié)束后必須用純水充分清洗后,再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護(hù)的溶劑(對于反相鍵合固定相,可以是甲醇或甲醇和水)

3、泵工作時要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動相用完,否則空泵運轉(zhuǎn)也會磨損柱塞、密封環(huán)或缸體,終產(chǎn)生漏液。

4、輸液泵的工作壓力不要超過規(guī)定的高壓力,否則會使高壓密封環(huán)變形,產(chǎn)生漏液。

 

紫外檢測器維護(hù)保養(yǎng):

1、流通池進(jìn)入氣泡會干擾基線,并極難排出,應(yīng)使用充分脫氣的流動相,以減少氣泡的產(chǎn)生。

2、應(yīng)定期沖洗系統(tǒng),避免流通池干涸。

3、檢測器中氘燈( 光源) 隨著使用時間的增加,氘燈強度降低,噪音會不斷增大,故分析前柱平衡得差不多時,再打開檢測器,分析工作結(jié)束及時關(guān)閉檢測器(頻繁開關(guān)檢測器也會縮短檢測器壽命,一般開啟間隔少于4小時,不建議關(guān)閉檢測器)。 

4、塵埃在靜電的作用下容易覆蓋在光學(xué)元件上, 使光傳播效率降低,增加了光散射, 影響分析效果, 因此檢測器周圍的環(huán)境應(yīng)保持清潔。




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