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chiral_agp 100.4操作說(shuō)明

閱讀：4328      發(fā)布時(shí)間：2011-7-21
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CHIRAL-AGP 100.4操作說(shuō)明
1、安裝
AGP100.4出貨溶劑為15%異丙醇蒸餾水溶液。先用蒸餾水沖洗，開始流速較低，然后慢慢增加到0.5ml/min，并維持2mins，隨后流速增加到0.8-0.9ml/min時(shí)保持10min，使用流動(dòng)相平衡色譜柱，推薦流速為0.8-0.9ml/min。
為了保護(hù)分析柱不被高親和力和顆粒雜質(zhì)污染，推薦使用保護(hù)柱，且必須定期更換保護(hù)柱，否則將影響分析柱的性能，用于生物分析時(shí)尤為重要。
2、保存
色譜柱室溫保存。使用時(shí)，可以在色譜系統(tǒng)中過(guò)夜。但是當(dāng)緩沖鹽中沒有有機(jī)改性劑，或者有機(jī)溶液中含有低濃度乙腈時(shí)，必須非常小心，因?yàn)樵谶@樣的流動(dòng)相中微生物生長(zhǎng)迅速。所以流動(dòng)相必須現(xiàn)場(chǎng)配制。周末或者短期保存，可將色譜柱置于10%異丙醇的蒸餾水中。長(zhǎng)時(shí)間的保存，請(qǐng)保存在15%的異丙醇蒸餾水中，使用前，請(qǐng)重復(fù)操作上面的安裝步驟。
3、流動(dòng)相組成
使用不同種類的緩沖液能得到的分離效果，比如：磷酸鈉或磷酸鉀緩沖液，乙酸銨或乙酸鈉緩沖液，甲酸甲酯或檸檬酸緩沖液。推薦濃度范圍0.01-0.1M，正常：10-20mM。
4、pH
色譜柱pH范圍：4-7，pH值長(zhǎng)時(shí)間的大于7或者小于4，都可能縮短色譜柱壽命，導(dǎo)致二氧化硅分解。
5、有機(jī)改性劑
推薦使用下列有機(jī)改性劑：1-丙醇，異丙醇，甲醇，乙醇和乙腈，丙醇和異丙醇及乙腈是使用頻繁的有機(jī)改性劑。無(wú)電荷改進(jìn)劑的類別和濃度對(duì)分離因子的影響很大。如：1-丙醇，異丙醇和乙腈在異構(gòu)體選擇性方面有很大的不同，見方法開發(fā)部分。使用陽(yáng)離子和陰離子改性劑也能調(diào)整保留時(shí)間和異構(gòu)體選擇性。但是，由于對(duì)基體的高親和力，有些改性劑很難全部洗脫，這樣，可能影響色譜柱的性能。我們推薦使用無(wú)電荷的、陰離子的、陽(yáng)離子的改性劑。
室溫范圍20-25℃，但是色譜柱也能在高于或低于該溫度下使用，然而當(dāng)色譜柱使用溫度過(guò)高時(shí)，對(duì)所有硅膠基色譜柱，都將縮短色譜柱壽命。
6、樣品
當(dāng)進(jìn)樣針體積為10-20μL時(shí)，推薦的樣品濃度低于0.10mg/ml，如果可能，將樣品溶解在流動(dòng)相中，如果樣品在流動(dòng)相溶解性不好，加一些高濃度的有機(jī)溶劑改性劑，但是有機(jī)改性劑的濃度太高，小心引起緩沖鹽析出沉淀。避免將樣品溶在有機(jī)溶劑中。不要注射不干凈的樣品或者樣品中包含有未溶解化合物。在生物分析過(guò)程中，使用分離技術(shù)過(guò)濾樣品溶液，定期更換保護(hù)柱。
7、清洗色譜柱
如果色譜柱被疏水性原料污染了，將色譜柱反過(guò)來(lái)（不接檢測(cè)器），用25%的異丙醇蒸餾水溶液沖洗一個(gè)晚上，流速0.2ml/min。
8、方法開發(fā)（UV檢測(cè)器）

樣品特征和初的流動(dòng)相
化合物類型
初流動(dòng)相
疏水性化合物
10mM醋酸銨或醋酸鈉緩沖液，pH4.5
親水胺，弱酸（苯酚等），非質(zhì)子類（胺，酯，醇等）
5%的異丙醇10mM磷酸鈉緩沖液，pH7.0
強(qiáng)酸（羧酸）
10mM磷酸鈉緩沖液，pH7.0
如果化合物包含一些官能團(tuán)，按照質(zhì)子官能團(tuán)確定使用下列哪種方法

 
疏水性胺：根據(jù)初流動(dòng)相得到的結(jié)果，請(qǐng)按下列流程

保留時(shí)間和異構(gòu)體選擇性
沒有或低異構(gòu)體選擇性，低保留時(shí)間
異構(gòu)體選擇性和保留時(shí)間都高
高保留時(shí)間，無(wú)異構(gòu)體選擇性
pH值或無(wú)電荷改進(jìn)劑的優(yōu)化。
逐漸增加pH值，用異丙醇調(diào)整保留時(shí)間，
          ↓
檢測(cè)另一中無(wú)質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
          ↓
測(cè)試低濃度質(zhì)子改進(jìn)劑：辛酸1-20mM；己酸或庚酸1-20mM；四乙基胺或四丙基胺1-5mM。
pH降低4，或增加異丙醇。
       ↓
測(cè)試另一中無(wú)質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
 
 
測(cè)試不同的無(wú)質(zhì)子改進(jìn)劑：異丙醇，乙腈，甲醇，丙醇，乙醇。
        ↓
測(cè)試低濃度質(zhì)子改進(jìn)劑：辛酸1-20mM；
己酸或庚酸1-20mM；四乙基胺或四丙基胺1-5mM。

 
親水性胺，弱酸，非質(zhì)子化合物：根據(jù)初流動(dòng)相得到的結(jié)果，請(qǐng)按下列流程

保留時(shí)間和異構(gòu)體選擇性
沒有或低異構(gòu)體選擇性，低保留時(shí)間
異構(gòu)體選擇性和保留時(shí)間都高
高保留時(shí)間，無(wú)異構(gòu)體選擇性
pH值或無(wú)電荷改進(jìn)劑或緩沖鹽的優(yōu)化。
降低異丙醇的濃度。
         ↓
測(cè)試另一中無(wú)質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
         ↓
胺：檢測(cè)低濃度質(zhì)子改進(jìn)劑：辛酸1-20mM；己酸或庚酸1-20mM；四乙基胺或四丙基胺1-5mM。
pH值逐漸減低，增加異丙醇的濃度。
        ↓
測(cè)試另一中無(wú)質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
 
見疏水性胺的操作流程

 
強(qiáng)酸（如羧酸）：根據(jù)初流動(dòng)相得到的結(jié)果，請(qǐng)按下列流程

保留時(shí)間和異構(gòu)體選擇性
沒有或低異構(gòu)體選擇性，低保留時(shí)間
異構(gòu)體選擇性和保留時(shí)間都高
高保留時(shí)間，無(wú)異構(gòu)體選擇性
pH值或無(wú)電荷改進(jìn)劑或緩沖鹽的優(yōu)化。
降低pH值，增加緩沖鹽濃度到50-75mM（高濃度100mM）
       ↓
試試低濃度（1-5mM）質(zhì)子改進(jìn)劑DMOA（N，N-二甲基辛胺）
添加異丙醇
 
 
          ↓
檢測(cè)不同的無(wú)質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
檢測(cè)不同的無(wú)質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
         ↓
試試低濃度（1-5mM）質(zhì)子改進(jìn)劑DMOA（N，N-二甲基辛胺）

 
 
AGP方法開發(fā)（MS檢測(cè)器）

樣品特征和初的流動(dòng)相
化合物類型
初流動(dòng)相
疏水性化合物
10mM醋酸銨緩沖液，pH4.5
親水胺，弱酸（苯酚等），非質(zhì)子類（胺，酯，醇等）
5%異丙醇的10mM醋酸銨緩沖液，pH7.0
強(qiáng)酸（羧酸）
10mM醋酸銨緩沖液，pH7.0
如果化合物包含一些官能團(tuán)，按照質(zhì)子官能團(tuán)確定使用下列哪種方法

疏水性胺：根據(jù)初流動(dòng)相得到的結(jié)果，請(qǐng)按下列流程

保留時(shí)間和異構(gòu)體選擇性
異構(gòu)體選擇性低或沒有，保留時(shí)間低
異構(gòu)體選擇性和保留時(shí)間都高
保留時(shí)間高，無(wú)異構(gòu)體選擇性
pH值或無(wú)電荷改進(jìn)劑的優(yōu)化。
逐漸增加pH值，用異丙醇調(diào)整保留時(shí)間，（濃度越低，選擇性越高）
          ↓
測(cè)試另一中無(wú)質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
          ↓
測(cè)試低濃度揮發(fā)性質(zhì)子改進(jìn)劑：TEA（三乙基胺）1-20mM
pH降低4，或增加異丙醇。
       ↓
測(cè)試另一中無(wú)質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
 
 
測(cè)試不同的無(wú)質(zhì)子改進(jìn)劑：異丙醇，乙腈，甲醇，丙醇，乙醇。
       ↓
測(cè)試低濃度揮發(fā)性質(zhì)子改進(jìn)劑：TEA（三乙基胺）1-20mM

 
親水性胺，弱酸，非質(zhì)子化合物：根據(jù)初流動(dòng)相得到的結(jié)果，請(qǐng)按下列流程

保留時(shí)間和異構(gòu)體選擇性
沒有或低異構(gòu)體選擇性，低保留時(shí)間
異構(gòu)體選擇性和保留時(shí)間都高
高保留時(shí)間，無(wú)異構(gòu)體選擇性
pH值或無(wú)電荷改進(jìn)劑或緩沖鹽的優(yōu)化。
降低異丙醇的濃度。
        ↓
測(cè)試另一中無(wú)質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
         ↓
胺：檢測(cè)低濃度揮發(fā)性質(zhì)子改進(jìn)劑：TEA（三乙基胺）1-20mM
pH值逐漸減低，增加異丙醇的濃度。
       ↓
測(cè)試另一中無(wú)質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
 
見疏水性胺的操作流程

 
強(qiáng)酸（如羧酸）：根據(jù)初流動(dòng)相得到的結(jié)果，請(qǐng)按下列流程

保留時(shí)間和異構(gòu)體選擇性
沒有或低異構(gòu)體選擇性，低保留時(shí)間
異構(gòu)體選擇性和保留時(shí)間都高
高保留時(shí)間，無(wú)異構(gòu)體選擇性
pH值或無(wú)電荷改進(jìn)劑或緩沖鹽的優(yōu)化。
降低pH值，增加緩沖鹽濃度到50-75mM（高濃度100mM）
         ↓
測(cè)試低濃度揮發(fā)性質(zhì)子改進(jìn)劑
添加異丙醇
 
 
       ↓
測(cè)試不同的無(wú)質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
測(cè)試不同的無(wú)質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇
 
        ↓
測(cè)試低濃度揮發(fā)性質(zhì)子改進(jìn)劑

9、保護(hù)柱的使用
為了保護(hù)分析柱不被高親和力和顆粒雜質(zhì)污染，推薦使用保護(hù)柱，且必須定期更換保護(hù)柱，否則將影響分析柱的性能，用于生物分析時(shí)尤為重要。
CHIRAL-AGP，CHIRAL-CBH，CHIRAL-HSA，均能提供保護(hù)柱
10、選擇適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)柱
為了優(yōu)化色譜系統(tǒng)性能，保護(hù)柱的內(nèi)徑必須和分析柱的內(nèi)徑相匹配，每種色譜柱的保護(hù)柱內(nèi)徑必須和分析柱相匹配，標(biāo)準(zhǔn)的保護(hù)柱套CH10.3，適合所有內(nèi)徑的保護(hù)柱芯（2，3和4mm）
 
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