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怎么排除凝膠色譜柱的氣泡?

閱讀:4834      發(fā)布時(shí)間:2022-5-30
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  凝膠色譜柱的填料是以剛性的球形硅膠為基質(zhì),在其表面通過(guò)共價(jià)鍵化學(xué)鍵合親水團(tuán)而成。色譜柱的填料具有高性能尺寸排阻色譜所需的性能,即低吸附性和良好的孔徑分布;其pH適合范圍為2.5~7.5,可以使用與水*互溶的有機(jī)溶劑,如乙腈、丙酮、甲醇或乙醇等。
 
  商品凝膠是干燥的顆粒,通常以40~63um的使用多。凝膠使用前需要在洗脫液中充分溶漲一至數(shù)天,如在沸水浴中將濕凝膠逐漸升溫到近沸,則溶漲時(shí)間可以縮短到1~2小時(shí)。凝膠的溶漲一定要*,否則會(huì)導(dǎo)致色譜柱的不均勻。熱溶漲法還可以殺死凝膠中產(chǎn)生的細(xì)菌、脫掉凝膠中的氣泡。
 
  由于凝膠色譜柱凝膠的分離是靠篩分作用,所以凝膠的填充要求很高,要使整個(gè)填充柱非常均勻,否則要重填。凝膠在裝柱前,可用水浮選法去除凝膠中的單體、粉末及雜質(zhì),并可用真空泵抽氣排出凝膠中的氣泡。
 
  在玻璃或有機(jī)玻璃的凝膠空柱,在柱的兩端皆有平整的篩網(wǎng)或篩板。將柱垂直固定,加入少量流動(dòng)相以排除柱中底端的氣泡,在加入一些流動(dòng)相于柱中約1/4的高度。柱頂部連接一個(gè)漏斗,頸直徑約為柱頸的一半,然后在攪拌下、緩慢的、均勻地、連續(xù)地加入已經(jīng)脫氣的凝膠懸浮液,同時(shí)打開(kāi)色譜柱的毛細(xì)管出口,維持適當(dāng)?shù)牧魉?,凝膠顆粒將逐層水平式上升,在柱中均勻地沉積,直到所需高度位置。然后拆除漏斗,用較小的濾紙片輕輕蓋住凝膠床的表面,再用大量洗脫劑將凝膠床洗滌一段時(shí)間。

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