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如何區(qū)分正相色譜柱和反相色譜柱

閱讀:6498      發(fā)布時間:2015-10-20
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         本質上是填料(固定相)的不同,正相色譜柱填料極性強,洗脫順序由弱到強;反相色譜柱填料極性弱,洗脫順序由強到弱。以下是詳細說明:

1、正相色譜

    正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica)以及其他具有極性官能團胺基團,如(NH2,APS)和氰基團(CNCPS)的鍵合相填料。

    由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其他極性基團極性較強,因此,分離的次序是依據(jù)樣品中各組分的極性大小,即極性較弱的組份先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,如正已烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。

2、反向色譜

    反向色譜用的填料常是以硅膠為基質,表面鍵合有極性相對較弱官能團的鍵合相。反向色譜所使用的流動相極性較強,通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組分先被沖洗出,而極性弱的組分會在色譜柱上有更強的保留。

常用的反向填料有:C18ODS)、C8MOS)、C4Butyl)、C6H5Phenyl)等。

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