在前述儀器工作原理部分，我們已經(jīng)指出，液相色譜儀的分離是在色譜分離柱中實現(xiàn)的。我們目前工作中多采用反相色譜柱 ，如何保護(hù)好分離柱減少柱的污染是延長柱壽命的關(guān)鍵。

3．1          怎樣維護(hù)好色譜分離柱

加保護(hù)柱 （預(yù)柱 ）是保護(hù)分離柱的有效辦法。保護(hù)柱是根內(nèi)裝填料與分離柱性質(zhì)相近的短柱，接在分離柱之前，或代替流路過濾器。保護(hù)柱的作用是收集和阻塞分離柱 口的化學(xué)垃圾 ，這些垃圾如果直接進(jìn)入分離柱會逐漸堆積在柱頭，更終降低柱效能。保護(hù)柱是消耗品，如分析血漿樣品，一般分析 50個樣品后需更換新柱芯。避免高壓沖擊分離柱。一般色譜柱都能承受得起高壓，但經(jīng)不住突然變化的高壓沖擊，這將改變柱床體積，影響柱效。引起高壓沖擊的原因主要有：進(jìn)樣器的樣品閥的緩慢轉(zhuǎn)動、泵啟動太快、柱切換等操作。用手動進(jìn)樣閥時的壓力變化不大 ，自動進(jìn)樣閥由于切換較慢，可能會造成壓力沖擊。合理選擇分離柱。我們知道，選擇色譜分離柱主要根據(jù)兩點，一是根據(jù)待測組分的分子量的大?。欢歉鶕?jù)流動相條件，包括 PH值、離子強度和溶劑極性等。傳統(tǒng)硅膠基質(zhì)的鍵合相柱要求流動相 PH值在 3—7之間， PH值 （>8）的流動相能溶解硅膠，使鍵合相流失。而目前利用先進(jìn)的雜化顆粒技術(shù)研制的高純硅膠顆粒填料 （如 Waters公司的XTerra色譜柱 ），集硅膠和多孔聚合物填料的優(yōu)點為一體，使有機硅烷單元取代了相當(dāng)一部分占據(jù)顆粒內(nèi)部和表面位置的硅羥基，使這種新型填料具有分辨率高、穩(wěn)定性強、PH范圍寬（1—12）的優(yōu)勢，其性能突破了傳統(tǒng)液相色譜柱的極限。所以一定要根據(jù)分析的對象、流動相的條件選擇合適的分離柱，茫然時可向公司的技術(shù)人員咨詢。 定期沖洗分離柱。每次分析工作結(jié)束時，沖洗完緩沖鹽后 ，更后要過度到用強溶劑沖洗柱子 ，如可用色譜純甲醇、乙腈沖洗反相 C18柱，目的是沖去吸附在柱的強保留組分。如果用甲醇 ／水為流動相也應(yīng)這樣沖洗柱子，在一定程度上可恢復(fù)柱效。

3．2 怎樣減少柱的污染?

更有效的辦法是純化樣品。我們在多年的分析工作中發(fā)現(xiàn)，凡是樣品純化的越干凈，分離柱的壽命就越長反之，只有提取沒有純化的樣品，分離柱柱效下降較快建立一個理想的色譜分析方法應(yīng)該有一套有效的樣品前處理方法，特別是在分析血漿和尿液樣品時，要特別注意樣品的提取與純化 ，盡量使處理過的樣品中雜質(zhì)（如大分子蛋白、有機物等）降到更低，保護(hù)柱頭和柱子。提取純化好的樣品更好用流動相來溶解 ，一方面減少色譜圖中的溶劑峰干擾，另一方面也是檢查樣品在流動相中的溶解性，如果樣品進(jìn)樣后在流動相中沉淀，會堵塞進(jìn)樣器和柱頭，甚至樣品分解，出現(xiàn)怪峰。如果出現(xiàn)樣品與流動相不溶要設(shè)法改變?nèi)芙鈼l件 ，如更換樣品溶劑，或改進(jìn)處理樣品的方法，或過濾，去除不溶性物質(zhì)。