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抗體純化的方法
點擊次數(shù)：1673 發(fā)布時間：2016-8-22
制備高特異性、價的抗體是實驗免疫學(xué)技術(shù)的基礎(chǔ)，抗體質(zhì)量的高低將直接影響試驗的成敗。 通過不同方法制備的抗體往往與多種雜蛋白混雜在一起，為了獲得成分相對單一的抗體或?qū)⒖贵w用于特定的用途，就需要進(jìn)行抗體純化?？贵w純化分了幾種類型，根據(jù)用途決定選擇哪種方法進(jìn)行純化：
1. 粗純：將制備抗體的血清或是腹水，細(xì)胞上清，直接用鹽析法進(jìn)行處理，這樣可以將這些物質(zhì)里面的其他雜質(zhì)去掉，獲得蛋白的成分，但是由于是粗純，里面會混有大量的其他蛋白，這樣獲得的抗體，純度較低，用于實驗中背景比較高。
2.通用型純化：用抗體結(jié)合蛋白Protein A，Protein G或者Protein L。因為不同來源的抗體和這些抗體結(jié)合蛋白的結(jié)合能力不同，所以需要根據(jù)抗體來源選擇使用哪種抗體將誒和蛋白。對于有一些單鏈抗體，則多半使用protein L來進(jìn)行純化。經(jīng)過抗體結(jié)合蛋白的親和純化后，溶液中基本只保留了抗體的成分，其他蛋白都去掉了，抗體純度可以比較高。相對來說，這種方法是大規(guī)?？贵w制備中，用得zui多的純化方法，很多抗體公司都采用這種方法來對抗體進(jìn)行純化。
3.特異型純化：但是有些抗體，需要純度特別高，特異性特別好，就不能簡單采用上述兩種方法進(jìn)行純化了。必須要通過將抗原固定制備成特異的親和純化柱，再純化抗體。這個時候得到的就全是針對一種抗原的抗體了，特異性。當(dāng)然，由于牽涉到抗原固定等操作，成本相應(yīng)是的。