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分享組織細(xì)胞內(nèi)抗原的固定
點(diǎn)擊次數(shù)：2335 發(fā)布時(shí)間：2018-11-27
分享組織細(xì)胞內(nèi)抗原的固定
組織細(xì)胞內(nèi)抗原的固定是免疫酶標(biāo)和非標(biāo)記免疫酶組織化學(xué)方法中的重要環(huán)節(jié)。經(jīng)過固定，可以達(dá)到如下目的：1.標(biāo)本在玻片上的吸著力增加；2.標(biāo)本所含的類脂和蠟質(zhì)等成分可以除去，從而有利于抗原與酶標(biāo)記抗體的結(jié)合；3.標(biāo)本的保存時(shí)間可以增長(zhǎng)，組織切片固定后，在－20℃，可以存放一年以上而不改變免疫酶技術(shù)的染色；組織內(nèi)有關(guān)抗原不同，則所用固定劑與固定方法也隨之改變。
丙酮和乙醇是常用的兩種固定劑。但對(duì)于許多病毒與細(xì)菌的定位研究，選擇丙酮和四氯化化碳作為固定劑是*合適的；對(duì)于可溶性蛋白抗原的定位，常用乙醇；對(duì)于多糖，則用8%－10%福爾馬林，而不用乙醇與丙酮等有機(jī)溶劑。
對(duì)于那些在表面覆蓋蛋白衣膜的抗原，還常用胰蛋白酶、黏蛋白酶、透明質(zhì)酸酶以及受體破壞酶進(jìn)行處理。有人報(bào)道，苦味酸－甲醛固定液應(yīng)用于肝組織內(nèi)甲種胎兒蛋白酶標(biāo)定位能獲得滿意結(jié)果。
對(duì)于植物病毒材料的固定，丙酮用得*多，乙醇次之。因?yàn)楸獙?duì)病毒的抗原性損害為*小，但對(duì)于那些不穩(wěn)定的病毒，則應(yīng)避免固定。
在應(yīng)用免疫酶技術(shù)時(shí)，固定處理對(duì)酶的活性的影響也得心中有數(shù)。許多固定劑對(duì)抗原的活性都會(huì)有所損害，盡管如此，對(duì)抗原的抗原性還是有損害，所以必須進(jìn)行抗原修復(fù)。
固定后的沖洗：固定后的材料常用中性磷酸緩沖液反復(fù)沖洗，以免在固定過程中可能彌散出來(lái)的物質(zhì)覆蓋表面。
固定標(biāo)本的保存：標(biāo)本材料經(jīng)固定后，要立即使用于免疫酶技術(shù)中，不要久貯。如實(shí)在要保存，應(yīng)置于冰箱（4℃）中，在干燥的情況下24h內(nèi)抗原性損失不大。在－20℃下，冰凍切片或涂片可保存1周到1個(gè)月，石蠟切片可保存數(shù)月以上。在－20℃下保存時(shí)，為了防止形成過多的冰結(jié)晶并發(fā)生組織細(xì)胞的變化，應(yīng)將切片浸入聚乙烯醇甘油溶液中，讓其在－20℃下形成固態(tài)保護(hù)膜，然后在免疫酶染色前用手指加溫，用生理鹽水輕輕洗去，每次5min,共洗3次。這樣保存的標(biāo)本，污染增多。某些干燥標(biāo)本（例如組織內(nèi)阿米巴抗原、組織自身抗原）貯于辛烷中可長(zhǎng)期保存（－30℃），并且?guī)缀鯚o(wú)污染。
固定的程序很簡(jiǎn)單，將固定劑用吸管加到標(biāo)本上去，或?qū)?biāo)本置于玻片架上浸入固定劑溶液中，固定后立即用磷酸緩沖液沖洗，然后在空氣中晾干或風(fēng)扇吹干。