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技術(shù)文章

地高辛檢測

點(diǎn)擊次數(shù):2483 發(fā)布時(shí)間:2016-3-24

地高辛標(biāo)記技術(shù)源于一種從洋地黃類植物(毛地黃和毛花毛地黃)中提取的類固醇物質(zhì)—DigoxideninDIG)。由于洋地黃植物的花和葉片Digoxidenin在自然界中的*來源,因此抗DIG的抗體不會(huì)與其他的生物物質(zhì)結(jié)合,從而可以滿足特異性標(biāo)記的需要。這一點(diǎn),正式DIG勝于生物素的(Biotin)的地方—同樣是小分子標(biāo)記物,生物素廣泛存在于各種組織中,對(duì)于靈敏度很高的標(biāo)記檢測實(shí)驗(yàn)來說,樣品自身含有的內(nèi)源生物素,就會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生干擾。地高辛就能夠很好地避免這個(gè)問題。

 

  1. 地高辛技術(shù)特點(diǎn)
    1. 可用于標(biāo)記核苷酸或蛋白質(zhì)
    2. 檢測方法:顯色法、熒光或化學(xué)發(fā)光法
    3. 安全環(huán)保,不接觸放射性物質(zhì),不會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染
    4. 曝光時(shí)間短,結(jié)果顯示時(shí)間以分鐘計(jì)算,無需幾小時(shí)甚至幾天的自顯影過程
    5. 地高辛標(biāo)記的探針至少可貯存一年以上,可一次大量制備
    6. 可輕松進(jìn)行探針剝離和重探

 

2.  應(yīng)用領(lǐng)域

地高辛系統(tǒng)能夠安全地標(biāo)記DNARNA或是寡聚核苷酸探針,這些探針可以廣泛應(yīng)用在:

  1. Southern blot,Northern blot,dot blot
  2. 菌斑雜交
  3. Microarray
  4. ELISA
  5. 原位雜交

 

3.  技術(shù)細(xì)節(jié)

DIG 通過一個(gè)含有11個(gè)碳原子的空間臂與尿嘧啶核苷酸上的C5位置相連,一定濃度的DIG標(biāo)記的核苷酸可以通過DNA polymerase(E.coli DNA Polymerase, T4 DNA Polymerase, T7 DNA Polymerase, Reverse Transcriptase, Taq DNA Polymerase )、RNA polymerase (SP6, T3T7 RNA Polymerase)或是末端轉(zhuǎn)移酶(Terminal Transferase)的作用摻入到核苷酸探針中;也可通過隨即引物標(biāo)記(random primed labeling, 缺口平移(nick translation),PCR,3端標(biāo)記/加尾或是體外轉(zhuǎn)錄制備帶有DIG標(biāo)記的探針。當(dāng)然也可以通過化學(xué)合成的方法進(jìn)行核苷酸的標(biāo)記。

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