ELISA試劑盒每次提蛋白后會將樣品在短時刻內重復2-3次WB，可是每次跑出的條帶趨勢不共同，上樣量和其他條件都沒有變，內參根本是規(guī)整安穩(wěn)的，不知道為什么意圖條帶就是不共同？
首要內參安穩(wěn)闡明上樣量安穩(wěn)（應該大致是一樣的），所以不存在什么上樣量不一樣的問題；呈現這樣的成果，問題出在每一步都有一定的可能性，比如電泳，轉膜，敷抗體，顯色等等。但據我所知，WBzui要害的仍是轉膜和敷抗體步驟，可能是你敷抗體的時分敷的不均勻。我的主張是你再認認真真，仔仔細細做幾遍，很可能重復性就做出來了。僅僅個人觀點。  
ELISA試劑盒根本操作的問題我們沒必要去考慮。我認為問題的要害在于成像的進程。同一張膜，本人能夠在成像的時分，做出*不同的圖片成果。顯色液的滴加，量，以及曝光時刻，條帶色彩（要求灰色而不是黑色）。所以有圖片闡明問題。  
說是內參共同，而意圖條帶每次都不一樣，我想說原因可能是在顯影液環(huán)節(jié)，簡單來說就是你的膜沒有淋潔凈，上面殘留參差不齊的T/TBS，T/TBS能稀釋顯影液，意圖條帶正本表達量就少，某一個點殘留的T/TBS略微多一點就可能導致顯影作用下降，所以主張在顯影液反響前，盡量將膜上的洗膜液淋掉（當然也不能讓膜干了，要是實驗室富裕的話，也能夠多添點顯影液，作用一樣），期望對你有協(xié)助。  
可能觸及幾個原因：1，拔梳子時膠錯動，參加樣本后進入其他孔或漏出。由于內參表達高，可能不會顯示出差異。2，參加樣本時不均勻也可能會發(fā)生差錯。3，制膠應確保均勻無氣泡，玻璃板潔凈，這樣才干確保成果共同牢靠。
ELISA試劑盒盡管用WB做出一張滿足的成果觸及多個環(huán)節(jié),但向上面你說到的內參沒有問題,闡明各項操作根本是過關的,據我猜想很可能是zui終一步曝光呈現的問題,加發(fā)光液反響的時刻及曝光的時刻都會對zui終的成果發(fā)生影響, 還有一種可能你的發(fā)光液的安穩(wěn)性或許不太好,期望對你有所協(xié)助,哪里說的不對也請多指導.