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研域(上海)化學(xué)試劑有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第18年

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您知道有哪些對(duì)ELISA試劑盒測(cè)定結(jié)果有影響的原因嗎?

時(shí)間:2019/8/15閱讀:1502
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ELISA試劑盒方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定,具有靈敏度高,操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn),但是在具體實(shí)驗(yàn)過程中影響因素較多,并且要按照嚴(yán)格的說明要求,在檢驗(yàn)中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常可見到一些錯(cuò)誤結(jié)果(即假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果)

 

影響ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:

 

①標(biāo)本因素;

 

②試劑因素;

 

③操作因素。

 

研域小編就標(biāo)本因素對(duì)ELISA測(cè)定的影響做如下總結(jié)。

 

一、類風(fēng)濕因子

 

人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合,從而導(dǎo)致假陽(yáng)性。

 

解決辦法

 

1.用F(ab)2替代完整的IgG;

 

2.標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63℃,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效);

 

3.檢測(cè)抗原時(shí),可以用2-巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中,使RF降解。

 

二、補(bǔ)體

 

ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中,抗體分子發(fā)生變構(gòu),其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來,使C1q 可以將二者連接起來,從而造成假陽(yáng)性。

 

解決辦法

 

1.用EDTA稀釋標(biāo)本;

 

2.用53℃,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。

 

三、嗜異性抗體

 

人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物(如鼠等)Ig(s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,也能造成假陽(yáng)性。

 

解決辦法

可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動(dòng)物Ig(s),但加入量不足或亞類不同時(shí)無效。

 

四、嗜靶抗原的自身抗體

 

抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測(cè)定結(jié)果。

 

解決辦法

 

測(cè)定前需用理化方法將其解離后再測(cè)定。

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