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色譜柱的平衡方法

閱讀:5283      發(fā)布時(shí)間:2016-4-18
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   色譜柱在使用前,進(jìn)行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是*條件),只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。
  色譜柱的平衡方法:
 ?。?)首先用0.2ml/min的流速將色譜柱平衡過夜,然后將流速升高到1.0ml/min沖洗30分鐘,以便將色譜柱的填料充分平衡至*狀態(tài),這樣可以保證色譜柱的使用壽命,并且保證在以后的使用中,獲得分析結(jié)果的重現(xiàn)性。
  (2)平衡過程中,將流速緩慢地提高。
 ?。?)用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線(緩沖鹽或離子對試劑度如果較低,則需要較長的時(shí)間來平衡)。
  流動(dòng)相的配制: 液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn):
 ?。?)流動(dòng)相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長時(shí)間保留在柱中)。
  (2)流動(dòng)相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
 ?。?)流動(dòng)相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時(shí)能得到好的分離效果;同時(shí)降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。
 ?。? )流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。 如使用UV檢測器,使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
 ?。?)流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。
 ?。?)在流動(dòng)相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

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