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結(jié)核分子藥敏試驗與NAT2基因型分析
閱讀：990 發(fā)布時間：2011-1-19目前已闡明了部分MT耐藥的分子機(jī)制，發(fā)現(xiàn)耐利福平（RFP）是由于其靶分子RNA聚合酶p亞單位的編碼基因rpoB突變所致；耐異煙肼（1NH）與過氧化物酶的編碼基因katG或烯酰基還原酶編碼基因inhA操縱子或烷基過氧化氫酶編碼基因ahpC操縱子或9-?；；d體蛋白合成酶編碼基因kasA改變有關(guān)；耐吡嗪酰胺（PZA）是由于其吡嗪酰胺酶編碼基因pncA突變所致；耐乙胺丁醇（EMB）與阿拉伯糖基轉(zhuǎn)移酶的編碼基因embABC操縱子突變有關(guān)；耐鏈霉素（SM）是由于其核糖體蛋白S12編碼基因rpsL和16SrRNA編碼基因rrs突變所致；耐喹諾酮類藥物主要是由于其DNA旋轉(zhuǎn)酶A亞單位編碼基因gyrA或B亞單位編碼基因gyrB突變所致。因此，應(yīng)用各種基因突變分析技術(shù)檢測耐藥基因突變，即可檢出耐藥的MT。但約5％～40％的耐藥分離株未能檢測出耐藥基因突變，說明還存在其他的耐藥機(jī)制有待研究。其他抗結(jié)核藥物（如環(huán)絲氨酸D、大環(huán)內(nèi)酯類藥物、乙硫異煙胺等）的耐藥分子機(jī)制尚在研究之中。
①PCR-SSCP技術(shù)。通過與野生型標(biāo)準(zhǔn)株對照，可確定野生型和突變型基因。該方法簡便、快速，但不能確定突變的部位和性質(zhì)。
②PCR-RFLP技術(shù)。具有較高的特異性，但只能用于分析已知序列特定位點的基因突變。目前主要應(yīng)用限制性內(nèi)切酶MboⅡ分析rpsL基因43位密碼子突變；應(yīng)用NlaⅢ和HaeⅢ分析embB基因306位密碼子突變；應(yīng)用Ncil分析katG基因463位密碼子多態(tài)性。
③PCR-直接測序法。能夠確定突變的部位與性質(zhì)，是檢測基因突變的決ㄐ苑椒?，但需DNA測序儀，費(fèi)用較高，難以在臨床普遍開展。
④單鏈探針反向雜交試驗。是應(yīng)用生物素修飾的特異引物擴(kuò)增DNA，將PCR產(chǎn)物變性后與固定在一張膜上的特異寡核苷酸探針雜交，通過酶免疫顯色法顯示結(jié)果。Innogenetics公司根據(jù)該原理推出了INNO-LiPA Rif。MT檢測試劑盒及配套的自動檢測儀（Auto-LIPA）用于檢測MT的耐RFP基因型。
⑤PCR-基因芯片分析法。該方法簡便、快速，是發(fā)展的趨勢。
N2乙酰轉(zhuǎn)移酶2（NAT2）基因型分析 NAT2主要是負(fù)責(zé)INH代謝，NAT2的表型或基因型不同INH清除率也不同。因此，在治療前，通過分析NAT2基因型可評價患者對藥物肝毒副作用的敏感性。目前全軍結(jié)核病中心正在進(jìn)行該方面的研究