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滅活內(nèi)源性酶及封閉內(nèi)源性生物素

閱讀:1397          發(fā)布時(shí)間:2010-7-12

在生物體組織內(nèi)均含有一定量的內(nèi)源性酶和內(nèi)源性生物素,如富含血細(xì)胞的組織標(biāo)本有大量具有活性的過氧化物酶,肝、脾、腎、腦及胚胎組織中富含生物素。如采用過氧化物酶檢測(cè)系統(tǒng)或堿性磷酸酶和NBT/BCIP顯色系統(tǒng)進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色時(shí).酶的作用是催化底物,使顯色劑顯色,而組織中的內(nèi)源性酶同樣也能催化底物,使其顯色,這就影響免疫組織化學(xué)染色的特異性。在使用親和素試劑的免疫組織化學(xué)染色中,內(nèi)源性生物素易結(jié)合親和素,形成親和素一生物素復(fù)合物,導(dǎo)致假陽性。所以在染色之前應(yīng)設(shè)法將組織內(nèi)的內(nèi)源性酶滅活或?qū)?nèi)源性生物素封閉,以保證染色的特異性。

(1)滅活內(nèi)源性過氧化物酶:將組織在3%甲醇—H2O2(3ml純甲醇中加入30%H2020.3ml,現(xiàn)用現(xiàn)配)中室溫浸泡10分鐘,繼而用PBS沖洗3次,每次5分鐘。

(2)滅活堿性磷酸酶:zui常用的方法是將左旋咪唑(以每毫升加24mg)加入底物液中并保持pH為7.6~8.2,可除去大部分內(nèi)源性堿性磷酸酶,對(duì)于仍能干擾染色的酸性磷酸酶可用0.05mol/L酒石酸抑制。

(3)封閉內(nèi)源性生物素:將組織切片用0.0l%親和素溶液室溫處理10~20分鐘,使其結(jié)合位點(diǎn)飽和,以消除內(nèi)源性生物素的活性。也可購買生物素阻斷劑試劑盒,其中A液為親和素.B液為生物素。使用時(shí)加A液l滴,室溫10分鐘,PBS沖洗3次,每次2分鐘;加B液1滴。室溫10分鐘.PBS沖洗3次,每次2分鐘。

 

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