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巨細(xì)胞病毒抗體IgM（CMVAb-IgM）檢測[測定方法]ELISA法[方法學(xué)原理]在微孔表面包被純化的巨細(xì)胞病毒抗原。被稀釋過的患者血清加入微孔中。如存在巨細(xì)胞病毒抗體—IgM可與微孔上抗原相結(jié)合。然后洗去未結(jié)合物質(zhì)，再加入酶聯(lián)液，與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合。洗去過量【詳細(xì)】

制備好DNA文庫后，用標(biāo)準(zhǔn)方法將DNA電轉(zhuǎn)人大腸桿菌中，得到轉(zhuǎn)化株并保存，然后制備噬菌體用于分析和篩選。在液體培養(yǎng)基中將轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞進(jìn)一步培養(yǎng)到對數(shù)生長期。經(jīng)過在液體培養(yǎng)基中的增殖，一些菌液用于甘油保種，剩下的用于制備噬菌體?；蛘呖梢酝ㄟ^將整個轉(zhuǎn)【詳細(xì)】

使用與其他噬菌體展示方法相同的步驟來對制備出的文庫的文庫容量和多樣性進(jìn)行鑒定。為了在篩選后得到序列與結(jié)構(gòu)的關(guān)系，應(yīng)保證在噬菌粒文庫中存在合理水平的過量，以確保在篩選步驟中所有克隆都能被取樣，這一點(diǎn)是很重要的。我們通常力爭讓文庫容量比理論上的【詳細(xì)】

[器材和試劑]●ABl377型測序儀●ABI的BigDye染液●ABl9700型PCR儀器●ABI藍(lán)色葡聚糖/EDTA上樣緩沖液●3mol/L的乙酸鈉●95％及70％的乙醇●0．4pmol/ul的fUSE5“超級反向”引物，或T7“超級上游”引物●一臺帶Qiagen2X96平板轉(zhuǎn)子或同等轉(zhuǎn)子的Qiagen4K15C型離心【詳細(xì)】

在篩選和測序后，下一步是將單克隆的結(jié)合性用以下三種形式顯示出來：首先，得自靶標(biāo)器官的、相對于無插入序列的噬菌體及其他器官和組織而數(shù)量增加的噬菌體；其次，在器官或組織的脈管系統(tǒng)上進(jìn)行免疫組化和免疫熒光染色時的陽性染色；第三，我們合成、注射以及【詳細(xì)】

[器材和試劑]●PBBST（PBS，0．1％BSA，0．1％Tween-20）●磁分離儀（Dynal）●f1Rl紫外滅活噬菌體●洗脫緩沖液（用甘氨酸將0．1mol/LHCl調(diào)整到pH2．2，1mg/mlBSA）●2rn01/LTris-HClpH9．0●LB-瓊脂培養(yǎng)基（1％細(xì)菌用胰蛋白胨，0．5％酵母提取物，1．5％細(xì)菌【詳細(xì)】

[器材和試劑]●噬菌體緩沖液●XLl-Blue或者DH5。F，TB細(xì)胞●IPTG（30mg/m1儲存液，水溶液；儲存在-20℃）●LB-瓊脂培養(yǎng)基+Amp/X-gal/IPTG●Luria-Bertani（LB）[L-液體培養(yǎng)基（1％細(xì)菌用胰蛋白胨，0，5％酵母提取物，0．085m01/LNaCl，pH7．2）]●LB+Amp（L-【詳細(xì)】

[器材和試劑]●LB+Amp●LB+Amp/Glu[LB，50ug/mlAmp，l％葡萄糖]●IPTG●M13K07輔助噬菌體（Stratagene）●PEG8000（Sigma）●NaCl●TBS●SW40異質(zhì)同晶聚合物管（Beckman）[方法]1．將含有單克隆噬菌粒的菌落接種到10ulLB+Amp/Glu中，37℃過夜培養(yǎng)（在lac啟動【詳細(xì)】

[器材和試劑]●直徑為60mm的聚苯乙烯培養(yǎng)皿（Falcon1007）●包被緩沖液●單克隆抗體（mAb）57D1。該抗體能識別M13噬菌體次要衣殼蛋白（pⅢ）N末端。它是用M13噬菌體顆粒免疫大鼠而獲得的。來自含57D1雜交瘤細(xì)胞的上清用50％（NH4）2SO4沉淀，然后在PBS中溶解【詳細(xì)】

互補(bǔ)DNA（cDNA）克隆基因的表達(dá)是基因分離與鑒定的一個極為有效的工具。用于篩選的核苷酸探針需要所感興趣基因的原始序列信息，而對于表達(dá)cDNA文庫的篩選只需要一個天然的配體或一個特異的抗體（單克隆或多克?。┳鳛樘结槨ｓw外篩選入噬菌體或質(zhì)粒展示的cDNA【詳細(xì)】

[器材和試劑]通用設(shè)備及試劑●滅菌水●無菌微量離心試管●無菌移液槍及移液管槍頭●微型離心機(jī)●臺式離心機(jī)A部分●無菌的0．2ml的細(xì)壁聚丙烯微型離心管●pfuDNA聚合酶（Stratagene）●10×pfu緩沖液，由提供PfuDNA聚合酶的廠商提供●dNTP混合液（每個10mmol/L【詳細(xì)】

[器材和試劑]●PBST●牛血清蛋白（BSA）（Sigma）●抗血清及gⅥ—cDNA噬菌體文庫●無菌15ml聚丙烯管（Falcon）●立式旋轉(zhuǎn)機(jī)●蛋白A—瓊脂糖凝膠珠（AmershamBiosciences）●無菌0．1mol/L鹽酸甘氨酸，pH2．2加0．1%（w/v）BSA●無菌2mol/LTris堿（未調(diào)節(jié)pH）【詳細(xì)】

[器材和試劑]●通用設(shè)備及試劑以及以下的設(shè)備和試劑：●無菌96孔帶蓋培養(yǎng)板（Costar）●LBAT●R408輔助噬菌體（Stratagene）●振蕩孵育箱●96孔復(fù)制板●PEG/NaCl（●PBS[方法]1．將克隆體接種到100ulLBAT96孔培養(yǎng)板上，并在37℃過夜振蕩培養(yǎng)（180r/min）。2．【詳細(xì)】

總體上，可以構(gòu)建兩大類抗體文庫：免疫文庫或天然文庫。免疫文庫是用免疫球蛋白（Ig）可變區(qū)（V）基因制備而成的，這些基因或來自免疫人群，或來自小鼠；其中的V基因高度偏向于能識別免疫原的抗體。因而，免疫文庫中分離的抗體親和力，遠(yuǎn)高于那些分離自同等規(guī)【詳細(xì)】

天然V區(qū)可以被看作是在經(jīng)歷過或未經(jīng)歷過抗原刺激的淋巴細(xì)胞中所發(fā)現(xiàn)的結(jié)構(gòu)。結(jié)果，有些擴(kuò)增的V基因?qū)侵嘏诺母蜗祷?，而另外的則含有B細(xì)胞與抗原相遇所誘導(dǎo)產(chǎn)生的突變體。這些基因擴(kuò)增所用引物可以識別V基因的5’端scFv單鏈抗體和J基因的3’端或者是CI。【詳細(xì)】

器材和試劑]●PCR試劑和設(shè)備●1ug任何舍有scFv及（GIy4Ser）3接頭的載體●RHuJH引物、RHuVκ引物和RHuVλ引物，10pmol/ul[方法]1．在0．5ml微量離心管內(nèi)配制用于擴(kuò)增的主混合液。所顯示的主混合液用于VH—Vκ接頭。對于VH—Vλ接頭的主混合液，n＝29。單個反【詳細(xì)】

器材和試劑]●PCR試劑和設(shè)備●Geneclear試劑盒（Qbiogene，Inc．）●V區(qū)特異性正向（JΚFOR和JΛFOR）和反向（VuBACK）PCR引物●scFv接頭DNA[方法]1．在0．5ml微量離心管內(nèi)配制以下PCR反應(yīng)混合液。配制成2個“反應(yīng)管”，1個含有V。文庫DNA，另1個則含有Vl文庫【詳細(xì)】

[器材和試劑]●T4DNA連接酶及10×緩沖液（NEB）●酚/氯仿（Sigma）●100%和70%乙醇，-20℃保存●消化的載體和scFv文庫●TE（10mmol/LTrispH8，lmmol/LEDTA）[方法]1.如下所述，配制兩個100ul連接混合液，其中1個用于VH-VκscFv文庫，另1個用于Vu-VλscFv文庫，【詳細(xì)】

[器材和試劑]●大腸桿菌TGl菌株（Stratagen）●37℃孵育箱（NewBrunswickScientmc）●SorvatlRC5離心機(jī)（或同類型），GS3轉(zhuǎn)頭（均在4℃預(yù)冷）●預(yù)冷的500m1聚丙烯離心管●2L有擋板錐形瓶●基本培養(yǎng)瓊脂板[105gK2HP04、4．5gKH2P04、1g（NH4）2S04、0．5gNa3C6【詳細(xì)】

YY11664瓊脂糖凝膠4FFBR進(jìn)分英文名稱：Sepharose4FFExclusionlimit：forglobularproteins：～3×107ａndfordextrans：～6×106Meanparticlesize：90umBeadsizerange：45～165umBeadstructure：highlycross-linkedagarose,4%or6%,respectively,sphericalFlowrate【詳細(xì)】