YIJI冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧（ROS）高質(zhì)熒光測定試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

YIJI冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧（ROS）高質(zhì)熒光測定試劑是一種旨在通過透膜熒光染色劑氯甲基二氯二氫熒光素二乙酯，在組織氧化損傷條件下，產(chǎn)生熒光，來定量檢測冰凍組織內(nèi)活性氧族的存在狀況的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。適宜于冰凍動物組織的分析。可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、衰老、代謝和營養(yǎng)學等的研究。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡易，定性檢測，性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

超氧自由基陰離子（superoxide radical；O2-）、過氧化氫（hydrogen peroxide；H2O2）、羥自由基或氫氧基（hydroxyl radical；OH-）、過氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氫過氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、過氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線態(tài)氧氣（singlet oxygen）等細胞內(nèi)活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產(chǎn)生和增多，將導致細胞衰老或凋亡。氯甲基二氯二氫熒光素二乙酯（6-chloromethyl-2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, acetyl ester；CM－H2DCFDA）是取代二氯二氫熒光素二乙酯（2′,7′-dichlorodihydrofluorescin diacetate；DCFH-DA）的升級產(chǎn)品，一種*自由通過細胞膜，并在細胞內(nèi)長期滯留而不易外漏的染色劑。一旦被過氧化氫、羥自由基或氫氧基、過氧化基、次氯酸等氧化，便產(chǎn)生熒光。據(jù)此測定組織細胞內(nèi)活性氧族的濃度。 

產(chǎn)品內(nèi)容

YIJI清理液（Reagent A）    50毫升

YIJI染色液（Reagent B）    100微升

YIJI稀釋液（Reagent C）    50毫升

產(chǎn)品說明書 1份

保存方式

保存YIJI染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，嚴格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器

培養(yǎng)箱或恒溫水槽：用于染色孵育

熒光顯微鏡：用于觀察熒光組織

實驗步驟

實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的YIJI染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，YIJI稀釋液（Reagent C）置于室溫預熱。然后移出10微升YIJI染色液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管，加入990微升YIJI稀釋液（Reagent C），混勻后，標記為YIJI染色工作液，置入暗室里。然后進行下列操作。

• 準備5片待測的厚為10微米的未經(jīng)固著處理的冰凍切片
• 置于室溫下，小心加上500微升預冷的YIJI清理液（Reagent A），鋪滿整個切片表面
• 小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升室溫預熱的YIJI染色工作液，鋪滿整個切片表面
• 在37℃濕潤培養(yǎng)箱里，孵育20分鐘（注意：避免液體蒸發(fā)）
• 小心移去切片上的YIJI染色工作液，避免光照
• 小心加上500微升YIJI清理液（Reagent A），鋪滿整個切片表面
• 小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在熒光顯微鏡下觀察（定性檢測）：激發(fā)波長490nm，散發(fā)波長520nm――熒光增強，表明活性氧族（ROS）含量高

注意事項

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 建議使用新鮮組織（手術(shù)切除后1小時內(nèi)）制成的冰凍切片
• 操作時，須戴手套
• YIJI染色工作液避免光照
• 孵育時，須避免光照
• 建議組織染色完成后，即刻進行熒光定性分析 
• 本公司提供陽性對照甲萘醌溶液，觀察組織熒光增強現(xiàn)象
• 本公司提供系列活性氧檢測試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰