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武漢愛斯佩科學(xué)儀器有限公司

分子生物學(xué)抗體芯片技術(shù)

時(shí)間:2010-6-18閱讀:2545
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抗體芯片是zui近發(fā)展起來的一種技術(shù),可以同時(shí)檢測(cè)幾百種蛋白質(zhì)表達(dá)水平,也可以用來研究蛋白質(zhì)翻譯后加工(磷酸化水平改變)
抗體芯片是zui近發(fā)展起來的一種技術(shù),可以同時(shí)檢測(cè)幾百種蛋白質(zhì)表達(dá)水平,也可以用來研究蛋白質(zhì)翻譯后加工(磷酸化水平改變)或者研究蛋白質(zhì)間相互作用,其原理是:大量不同抗體被按照預(yù)定的順序排列并固定在固體支持物上且保留有結(jié)合其相應(yīng)抗原的能力,可以在和蛋白質(zhì)樣品一起孵育的程度中識(shí)別并捕捉抗原。因此抗原以及與抗原相連的蛋白質(zhì)就可以被芯片結(jié)合用來進(jìn)行研究。
A:蛋白質(zhì)表達(dá)譜檢測(cè)
抗體芯片可以用來檢測(cè)兩個(gè)不同樣品之間蛋白質(zhì)的表達(dá)水平的相對(duì)差異,一次實(shí)驗(yàn)可以比較出數(shù)百種蛋白質(zhì)的表達(dá)水平變化。
高通量:一次實(shí)驗(yàn)?zāi)芡瑫r(shí)檢測(cè)數(shù)百個(gè)乃至于上千個(gè)蛋白質(zhì)的表達(dá)水平變化。
樣品用量少:減少珍貴樣品的用量。
特異性高:假陽性率低。
實(shí)驗(yàn)周期短:操作簡單,加快研究進(jìn)程。
操作流程如圖:
B:蛋白質(zhì)磷酸化的檢測(cè)
  蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能不僅僅在表達(dá)水平上受到調(diào)節(jié),并且其翻譯后修飾作用也被生物體廣泛用于起功能調(diào)節(jié)。蛋白質(zhì)通過激酶磷酸化和磷酸酶去磷酸化可以調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的活性、定位及其穩(wěn)定性。由于蛋白質(zhì)的磷酸化在生物體內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)過程中起到相當(dāng)重要和廣泛的作用,因此對(duì)于蛋白質(zhì)的磷酸化檢測(cè)具有重要的生物學(xué)意義。
  蛋白質(zhì)磷酸化檢測(cè)芯片上以陣列的形式排列了多種蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)的抗體,首先蛋白樣品在一定條件下與芯片孵育,相應(yīng)的蛋白就可結(jié)合到相應(yīng)的抗體上。然后用熒光染料(如Cy3、Cy5等)標(biāo)記的磷酸化酪氨酸(或是絲氨酸、蘇氨酸)的抗體與芯片孵育,使之與芯片結(jié)合。芯片經(jīng)激光掃描儀掃描,所得的信號(hào)強(qiáng)度與該位點(diǎn)抗體所針對(duì)蛋白的磷酸化水平相對(duì)應(yīng)。相對(duì)其他研究蛋白質(zhì)磷酸化的技術(shù)(如western blot)而言,蛋白質(zhì)磷酸化芯片的篩選方法要可以同時(shí)處理多個(gè)樣品,檢測(cè)數(shù)百個(gè)乃至于上千個(gè)蛋白質(zhì)的磷酸化程度。這一技術(shù)作為一種高通量的定性分析工具,可以用于檢測(cè)刺激、藥物處理后某些信號(hào)通路的激活、特定蛋白的活化等相關(guān)信息。
高通量:一次實(shí)驗(yàn)?zāi)芡瑫r(shí)檢測(cè)數(shù)百個(gè)乃至于上千個(gè)蛋白質(zhì)的磷酸化水平。
樣品用量少:減少珍貴樣品的用量。
特異性高:假陽性率低。
實(shí)驗(yàn)周期短:操作簡單,加快研究進(jìn)程。
C:蛋白質(zhì)相互作用的檢測(cè)
  當(dāng)你要研究某一蛋白靶蛋白與其他蛋白相互作用時(shí),你可以通過蛋白質(zhì)相互作用芯片進(jìn)行檢測(cè)。芯片上以陣列的形式排列了多種蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)的抗體,首先蛋白樣品在一定條件下與芯片孵育,相應(yīng)的蛋白就可結(jié)合到相應(yīng)的抗體上,由于蛋白質(zhì)相互作用,靶蛋白通過蛋白質(zhì)相互作用也可間接地連接在芯片其他不對(duì)應(yīng)的抗體位點(diǎn)上。利用靶蛋白所對(duì)應(yīng)的一抗與芯片孵育,抗體結(jié)合到這些所有位點(diǎn)。然后用熒光染料(如Cy3、Cy5等)標(biāo)記的二抗與芯片孵育,使之與芯片結(jié)合。芯片經(jīng)激光掃描儀掃描,所得的信號(hào)強(qiáng)度與該位點(diǎn)抗體所針對(duì)蛋白與靶蛋白相互作用能力成正比。相對(duì)其他研究蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)而言,蛋白質(zhì)相互作用芯片的篩選方法要簡便的多,實(shí)驗(yàn)周期更短。
  通過蛋白質(zhì)相互作用芯片技術(shù),你可以同時(shí)處理多個(gè)樣品,檢測(cè)靶蛋白與數(shù)百個(gè)乃至于上千個(gè)蛋白質(zhì)的相互作用。這一技術(shù)作為一種高通量的定性分析工具,可以用于篩選與靶蛋白相互作用的相關(guān)蛋白質(zhì),從而研究蛋白在細(xì)胞中某些信號(hào)通路中的定位,及其可能的生物學(xué)功能。
高通量:一次實(shí)驗(yàn)?zāi)芡瑫r(shí)檢測(cè)數(shù)百個(gè)乃至于上千個(gè)蛋白質(zhì)的相互作用。
樣品用量少:減少珍貴樣品的用量。
特異性高:假陽性率低。
實(shí)驗(yàn)周期短:操作簡單,加快研究進(jìn)程。

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