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黃曲霉毒素B1的實驗步驟

、自備物品

微孔板酶標(biāo)儀（含450nm）、振蕩器、粉碎機、微量移液器、量筒、漏斗、容量瓶、快速定性濾紙、氯化鈉（分析純）、甲醇（分析純）、去離子水或蒸餾水。

 樣品處理   取5g粉碎的有代表性的樣品，加1.25g氯化捺及250mL70%甲醇溶液，強力振蕩3min，用快速定性濾紙過濾。取50μL稀釋液進(jìn)行分析。根據(jù)需要可以增加樣品量，但甲醇溶液的量也應(yīng)相應(yīng)增加。

  實驗步驟

1試劑盒平衡至室溫。取所需數(shù)量的板條插入微孔架，記錄樣品及標(biāo)準(zhǔn)的位置。

2加入50μL標(biāo)準(zhǔn)品或處理好的樣品到微孔，每個標(biāo)準(zhǔn)和樣品必須使用新的吸頭。

3加入50μL抗AF B1單克隆抗體使用液到每個微孔，37℃避光孵育90min。

4甩掉空中液體，用洗液洗滌微孔板3min×3次，zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。

5每孔加入酶標(biāo)物100μL，37℃避光孵育60min。

6用洗液洗滌微孔板3min×3次，zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打已*除去孔液體。

7沒空加入顯色液100μL（2滴），37℃避光孵育10min。

8每孔加入終止液50μL（1滴），立即用酶標(biāo)儀在波長450nm處測定吸光度值（OD）值。

測定

1目測法：未加終止液前目測。比較樣品孔與標(biāo)準(zhǔn)1的微孔顏色，若淺，則為陽性；若深，則為陰性；顏色接近則需用酶標(biāo)儀測吸光度值比較。

2儀器法：用酶標(biāo)儀在450nm波長處測定吸光度值。